KRAS对T⁃ALL细胞株增殖及凋亡的影响
The Effect of KRAS on Proliferation and Apoptosis of T⁃ALL Cell Lines作者机构:重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014 上海交通大学附属儿童医院临床研究中心上海交通大学医学院儿童感染免疫与重症医学研究院上海200062
出 版 物:《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)
年 卷 期:2022年第30卷第4期
页 面:1040-1048页
核心收录:
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
基 金:国家自然科学基金(81870126 82070167 81900190)。
主 题:RAS 急性T淋巴细胞白血病 细胞增殖 细胞凋亡
摘 要:目的:探讨RAS蛋白家族在维持T⁃ALL细胞株体外生长中的功能。方法:纯化T⁃ALL细胞株DNA,利用PCR法扩增3个RAS基因(KRAS、NRAS、HRAS)的编码区。经T⁃A克隆后,Sanger法对KRAS、NRAS、HRAS基因编码区测序。将siRNA克隆到pSEH⁃361载体,在HEK⁃293T细胞中与pAMPHO和pVSVG一起包装成逆转录病毒,随后感染T⁃ALL细胞。qRT⁃PCR和Western blot检测基因表达情况。利用Annexin V⁃PE/7⁃AAD染色T⁃ALL细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用Hoechst 33258染色T⁃ALL细胞,流式细胞术检测细胞周期分布情况。经抗体染色,荧光显微镜观察cleaved⁃Caspase 3蛋白的表达。结果:在T⁃ALL细胞株中,除Loucy和P12⁃ICH细胞KRAS基因发生c.6187GA(p.KRASG12D)突变,其余RAS基因均未发现错义突变。除PEER细胞(IC_(50)=47.916μmol/L)外,泛RAS抑制剂Compound 3144对其它T⁃ALL细胞均有一定杀伤作用。同样,除PEER细胞(IC_(50)=94.2265μmol/L)外,Tipifarnib可诱导多种T⁃ALL细胞凋亡。抑制KRAS表达后,T⁃ALL细胞凋亡明显,细胞周期阻滞。结论:KRAS蛋白维持T⁃ALL细胞株体外生长,是治疗T⁃ALL的潜在药物靶点。