罗非鱼无乳链球菌ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除菌株的构建及其特性分析

作     者：马艳平 郝乐 冯国清 梁志凌 马江耀 柯浩 刘振兴 MA Yanping;HAO Le;FENG Guoqing;LIANG Zhiling;MA Jiangyao;KE Hao;LIU Zhenxing

作者机构：广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640 

出 版 物：《南方水产科学》 (South China Fisheries Science)

年 卷 期：2022年第18卷第4期

页      面：76-86页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广东省自然科学基金项目(2021A1515010498) 广东省农业科学院水产研究中心课题(XT202232) 佛山市财政专项资金—2021年度共建广东农业科技示范市项目。 

主　　题：罗非鱼 无乳链球菌 Ⅶ型分泌系统膜蛋白 敲除菌株构建 生物学特性分析 

摘      要：Ⅶ型分泌系统存在于无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)中,其组成膜蛋白对底物蛋白的分泌转运至关重要。为此利用热敏型自杀质粒,构建了含氯霉素筛选标签的膜蛋白重组敲除载体pSET4s-ΔessA、pSET4s-ΔessB、pSET4s-ΔessC,经同源重组后,利用PCR技术筛选到了其缺失突变株-无乳链球菌ΔessA、ΔessB、ΔessC。通过菌株生长曲线分析,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较野生株(WT)生长过程变慢,其中ΔessA、ΔessB敲除株在生长早期有显著性差异(P0.01)。对ESAT6蛋白分泌影响分析显示,与WT株相比,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株ESAT6的表达量均显著下调(P0.01)。结果显示,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较WT株毒力显著降低(P0.01)。研究表明,essA、essB、essC为无乳链球菌Ⅶ型分泌系统重要的膜蛋白,其基因缺失造成了分泌蛋白ESAT6 mRNA表达水平下降,影响了菌株毒力。