牛病毒性腹泻病毒可视化一步RT-LAMP检测方法的建立

作     者：张宇名 李树凡 陈志远 迟丽丽 刘健 于泽海 张玫瑜 徐守振 ZHANG Yu-ming;LI Shu-fan;CHEN Zhi-yuan;CHI Li-li;LIU Jian;YU Ze-hai;ZHANG Mei-yu;XU Shou-zhen

作者机构：青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第8期

页      面：985-991页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFD0501403) 

主　　题：牛病毒性腹泻病毒 RT-LAMP 可视化 

摘      要：为建立可视化一步RT-LAMP检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据GenBank中的BVDV的5′UTR序列,设计2组RT-LAMP引物,经过反应温度、反应时间、Mg^(2+)和甜菜碱的终浓度的优化,特异性及灵敏性试验,对3种常用显色指示剂钙黄绿素-MnCl_(2)、羟基萘酚蓝和中性红的显色效果进行评估,并使用商品化ELISA试剂盒与本方法进行对照试验。结果显示,经优化本方法在66℃30 min即可完成反应,采用中性红作为显色指示剂,检测BVDV可产生特异阳性反应;对BVDV RNA检测下限最低达0.021 pg/μL;对13份临床样品检测结果与商品化ELISA检测试剂盒相符率100%。结果表明,所建立的BVDV可视化一步RT-LAMP检测方法的特异性、灵敏性较好,可为BVDV临床快速检测提供帮助。