人MAPK3基因克隆及其在肝细胞癌细胞中的作用

作     者：倪佳 徐莹莹 邓婉玲 宋苗苗 石静 孙达权 Ni Jia;Xu Yingying;Deng Wanling;Song Miaomiao;Shi Jing;Sun Daquan

作者机构：贵阳市妇幼保健院·贵阳市儿童医院贵州贵阳550001 宁波市第一医院疝肝胆肛肠外科浙江宁波315000 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 

出 版 物：《遵义医科大学学报》 (Journal of Zunyi Medical University)

年 卷 期：2022年第45卷第4期

页      面：463-469页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:81560390) 贵州省科学技术基金资助项目(NO:黔科合基础1147)。 

主　　题：肝细胞癌细胞 MAPK3基因 细胞增殖 迁移 侵袭 

摘      要：目的克隆人MAPK3基因,探讨MAPK3基因对肝细胞癌细胞的作用。方法以肝细胞总RNA为模板,利用RT-PCR体外扩增获得人MAPK3基因的蛋白编码区,并构建重组真核表达载体pEYFP-MAPK3;脂质体转染和G418药物筛选获得MAPK3稳转肝癌细胞株;蛋白免疫印迹检测稳转肝癌细胞株中外源MAPK3蛋白的表达量;实时无标记细胞分析技术检测MAPK3基因对肝癌细胞增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别MAPK3基因对肝癌细胞迁移和侵袭的影响;蛋白免疫印迹检测ERK信号通路靶基因及上皮-间质细胞转化标志物的表达变化。结果RT-PCR克隆获得人MAPK3基因,成功构建重组真核表达载体pEYFP-MAPK3并获得MAPK3基因稳转肝癌细胞株,发现MAPK3基因可以促进人肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,通过磷酸化活化Stat3,促进c-Myc、MMP-2和N-Cadherin表达升高和抑制E-Cadherin表达。结论成功克隆人MAPK3基因并证明MAPK3可以有效促进肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。