基于报告基因的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性测定方法建立

作     者：李娜 吴振华 梅小芬 柳颖 陈瑶 陈娟 蒋美珠 王海彬 LI Na;WU Zhen-hua;MEI Xiao-fen;LIU Ying;CHEN Yao;CHEN Juan;JIANG Mei-zhu;WANG Hai-bin

作者机构：浙江博锐生物制药有限公司台州318000 

出 版 物：《中国新药杂志》 (Chinese Journal of New Drugs)

年 卷 期：2022年第31卷第15期

页      面：1474-1479页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主　　题：抗CD3×GPRC5D双特异性抗体 生物学活性 报告基因法 

摘      要：目的:建立抗CD3×GPRC5D双特异性抗体(bispecific antibody, BsAb)生物学活性的报告基因测定方法。方法:构建Jurkat/NFAT-Luc转基因细胞株作为效应细胞,MM.1R细胞系作为靶细胞,建立和优化抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性检测方法并进行方法学验证。分别用优化后的报告基因法和PBMC杀伤试验评价不同类型的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性。结果:报告基因法优化后确定靶细胞为MM.1R细胞,细胞铺板密度为2×10^(4)个·孔^(-1),效靶比1∶1,抗体起始浓度为20μg·mL^(-1),2倍稀释1次后,再6倍梯度稀释,共10个浓度点,诱导时间6 h。方法验证结果说明该方法具有良好的专属性,制备50%,75%,100%,150%和200%理论效价样品,进行准确性、精密度和线性验证,结果显示生物学活性回收率在97.85%~106.51%,变异系数均10%;相对效价理论值与实测值直线回归分析相关系数为0.997 8。同时,该方法适用于各类抗CD3×GPRC5D双特异性抗体,均有较好的剂量反应曲线,且与PBMC杀伤试验结果具有较好的一致性。结论:本研究成功建立抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性的报告基因检测方法,该方法具有较高的准确性和精密度,且特异性良好,可作为此类双特异性抗体活性评价的常规方法。