坐骨神经损伤后长链非编码RNA的聚类分析及长链非编码RNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响

作     者：罗选翔 潘彬 冯虎 Luo Xuanxiang;Pan Bin;Feng Hu

作者机构：南京市高淳人民医院骨科南京211300 徐州医科大学附属医院骨科徐州221000 

出 版 物：《中华解剖与临床杂志》 (Chinese Journal of Anatomy and Clinics)

年 卷 期：2022年第27卷第8期

页      面：574-580页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81801213) 

主　　题：周围神经损伤 坐骨神经损伤 长链非编码核糖核酸MX1 雪旺细胞 模型,动物 

摘      要：目的探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA(LncRNA)差异表达的基因,以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只,随机分为0 d(T0)、3 d(T1)、7 d(T2)和14 d(T3)4组,每组6只,建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA,制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析,筛选出各个时间点发生差异表达的基因,并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞,分为对照组、Control siRNA组(siRNA组)和LncRNA MX1 siRNA组(siRNA-MX1组),使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况,采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力,采用5-乙炔基-2 -脱氧尿苷(EDU)实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果各组大鼠均造模成功,实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示,与T0组比:T1组共3066个LncRNA基因发生差异性表达,其中1634个LncRNA基因表达上调,1432个LncRNA基因表达下调;T2组共2498个LncRNA基因发生差异性表达,其中1634个LncRNA基因表达上调,864个LncRNA基因表达下调;T3组3567个LncRNA基因发生差异性表达,其中有1643个LncRNA基因表达上调,1924个LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大,差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示,转染LncRNA MX1 siRNA后,siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2,低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2,差异有统计学意义(F=78.47,P0.05)。迁移、增殖试验结果显示,siRNA-MX1组细胞迁移数量为(24.1±4.2)个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%,低于对照组的(50.3±7.8)个、44.1%±7.2%和siRNA组的(49.2±6.2)个、41.8%±7.0%,差异均有统计学意义(F=93.15、121.26,P值均0.05)。结论大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著,下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。