TAT-GluA2CT干扰GluA2/TARPγ-8耦合对癫痫持续状态模型大鼠神经损伤的保护作用

作     者：王梦露 王英燕 王纪文 Wang Menglu;Wang Yingyan;Wang Jiwen

作者机构：上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心神经内科上海200127 

出 版 物：《中华实用儿科临床杂志》 (Chinese Journal of Applied Clinical Pediatrics)

年 卷 期：2022年第37卷第11期

页      面：855-860页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(8177051141)。 

主　　题：癫痫持续状态 α-氨基-3-羟基-5-甲基异唑-4-丙酸受体 AMPA受体跨膜调节蛋白家族 GluA2/TARPγ-8复合物 

摘      要：目的探究应用干扰肽TAT-GluA2CT对氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型大鼠海马神经元的保护作用以及最合适的给药时间。方法应用氯化锂-匹罗卡品建立大鼠癫痫持续状态模型(雄性, 72只), 同时设立对照组(12只)。采用随机数字表法将大鼠分为癫痫组(12只), 对照肽组(12只), 干扰肽组(48只), 根据给药的时间不同将干扰肽组又分为前1 h组(12只), 后2 h组(12只), 后4 h组(12只)和后6 h组(12只)。选择对照组、对照肽组、前1 h组、后2 h组、后4 h组、后6 h组各6只, 采用Nissl染色、原位末端标记(TUNEL)染色观察海马CA1区神经元形态变化、凋亡发生;选择对照组、对照肽组、前1 h组、后2 h组、后4 h组、后6 h组各6只, 采用Western blot和免疫共沉淀实验检测α-氨基-3-羟基-5-甲基异唑-4-丙酸(AMPA)受体第二亚单位GluA2表达和GluA2/AMPA受体胯膜调节蛋白家族γ-8(TARPγ-8)复合物耦合的变化情况。采用t检验比较2组间数据差异, 用单因素方差分析进行各组间差异的比较。结果应用干扰肽后, 与癫痫组相比, 各干扰肽组神经元数量明显增加, 差异有统计学意义(癫痫组20.07±3.51, 前1 h组39.40±2.39, 后2 h组38.43±2.42, 后4 h组30.30±2.55, 后6 h组27.93±3.20, F=235.28, P0.05);各干扰肽组与癫痫组相比, 凋亡细胞数量明显减少, 差异有统计学意义(癫痫组31.47±3.19, 前1 h组7.30±3.45, 后2 h组9.27±3.81, 后4 h组12.86±3.08, 后6 h组14.43±3.13, F=248.60, P0.05);与对照组相比, 诱导癫痫后海马GluA2表达量减少, 差异有统计学意义(对照组21 626.53±2 700.58, 癫痫组14 578.16±2 917.02, 前1 h组13 375.47±3 180.54, 后2 h组15 244.10±1 390.41, 后4 h组15 799.16±4 559.49, 后6 h组15 722.95±1 756.01, F=3.83, P0.05), 各干扰肽组与癫痫组之间GluA2表达量差异无统计学意义(F=0.45, P=0.77);与癫痫组相比, 各干扰肽组GluA2/TARPγ-8耦合减少, 差异有统计学意义(癫痫组24 509.80±3 718.54, 前1 h组12 055.18±5 847.11, 后2 h组9 630.51±5 805.17, 后4 h组12 749.35±7 108.45, 后6 h组11 092.98±7 330.08, F=10.68, P0.05);与癫痫组相比, 前1 h组大鼠发作潜伏期延长、发作评级降低, 差异有统计学意义[癫痫组潜伏期(18.58±3.99) min, 前1 h组(103.25±9.21) min, t=29.23, P0.05]。结论干扰肽TAT-GluA2CT可减轻癫痫大鼠海马区神经元损伤, 在匹罗卡品前1 h或后2 h应用干扰肽对于神经元的保护作用最为明显。