重组人死亡受体6胞外结构域的制备及与淀粉样前体蛋白N端片段相互作用鉴定

作     者：牛纯青 高香 罗金华 李伟 刘秋萍 陈韵 刘堰 NIU Chun-qing;GAO Xiang;LUO Jin-hua;LI Wei;LIU Qiu-ping;CHEN Yun;LIU Yan

作者机构：西南大学生命科学学院重庆400715 重庆市生物技术研究所有限责任公司重庆401121 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2016年第36卷第2期

页      面：1-6页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：重庆市自然科学基金(CSTC.2011BB0146)资助项目 

主　　题：阿尔茨海默病 死亡受体-6 淀粉样前体蛋白 毕赤酵母 GST pull down 

摘      要：人淀粉样前体蛋白氨基端切割片段(a cleaved amino-terminal fragment of amyloid precursor protein,N-APP)结合死亡受体6(Death receptor-6,DR6),会触发神经元和轴突依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的自我毁灭过程,从而导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发生。为了在分子水平上研究N-APP-DR6诱导神经元退化途径,制备大量纯化的重组DR6胞外结构域以及鉴定NAPP和DR6胞外结构域的结合位点是关键。从甲醇毕赤酵母中成功表达并纯化了重组DR6胞外域(aa42-349),得率高达90 mg/L。为了验证DR6和NAPP的相互作用关系,构建谷胱甘肽转移酶-死亡受体6(GST-DR6)(aa42-349)融合蛋白原核表达质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli,***)BL21,表达融合蛋白GST-DR6(aa42-349),同时纯化得到DR6的配体NAPP,GST pull-down结果显示DR6与NAPP能够在细胞外发生相互作用。