蓖麻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RcPK2基因克隆及蛋白纯化

作     者：赵永 温李 谢志明 高金秋 柴泽斌 汪雨琪 李涵冰 李洋 丛建民 

作者机构：白城师范学院生命科学学院 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2022年

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：吉林省科技发展计划项目(YDZJ202201ZYTS453) 吉林省教育厅科学技术项目(JJKH20220010KJ)共同资助 

摘      要：蓖麻(Ricinus communis L.)为大戟科蓖麻属一年生或多年生草本植物，蓖麻油在工业、食品、医药等领域有着广泛的应用。但目前由于非生物胁迫导致蓖麻产量降低，影响蓖麻产业的可持续性发展。受体蛋白激酶在响应植物非生物胁迫过程中起到重要的作用。因此本研究通过PCR技术克隆蓖麻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RcPK2基因，获得1 445 bp的cDNA序列，编码481个氨基酸，其分子量为54 kD。通过生物信息学分析发现：RcPK2不存在跨膜结构域，为疏水性蛋白质；定位于细胞核；二级结构中有33.06%的α-螺旋，15.49%的延伸链，4.57%的β-转角，46.78%的无规卷曲；磷酸化丝氨酸的预测位点数目最多为25个，其中第453位评分最高；进化树分析表明与麻风树亲缘关系最近。构建原核表达载体pGEX-4T-RcPK2，转化BL21 (DE3)大肠杆菌感受态细胞，在16℃下不同浓度的IPTG均诱导表达出GST-RcPK2重组蛋白质(81 KD)，当IPTG浓度为0.5 mmol时重组蛋白表达量最高。