蓖麻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RcPK2基因克隆及蛋白纯化
Gene Cloning and Protein Purification of Ricinus communis L. Serine/Threonine Protein kinase RcPK2作者机构:白城师范学院生命科学学院
出 版 物:《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)
年 卷 期:2022年
基 金:吉林省科技发展计划项目(YDZJ202201ZYTS453) 吉林省教育厅科学技术项目(JJKH20220010KJ)共同资助
摘 要:蓖麻(Ricinus communis L.)为大戟科蓖麻属一年生或多年生草本植物,蓖麻油在工业、食品、医药等领域有着广泛的应用。但目前由于非生物胁迫导致蓖麻产量降低,影响蓖麻产业的可持续性发展。受体蛋白激酶在响应植物非生物胁迫过程中起到重要的作用。因此本研究通过PCR技术克隆蓖麻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RcPK2基因,获得1 445 bp的cDNA序列,编码481个氨基酸,其分子量为54 kD。通过生物信息学分析发现:RcPK2不存在跨膜结构域,为疏水性蛋白质;定位于细胞核;二级结构中有33.06%的α-螺旋,15.49%的延伸链,4.57%的β-转角,46.78%的无规卷曲;磷酸化丝氨酸的预测位点数目最多为25个,其中第453位评分最高;进化树分析表明与麻风树亲缘关系最近。构建原核表达载体pGEX-4T-RcPK2,转化BL21 (DE3)大肠杆菌感受态细胞,在16℃下不同浓度的IPTG均诱导表达出GST-RcPK2重组蛋白质(81 KD),当IPTG浓度为0.5 mmol时重组蛋白表达量最高。