烟草坏死病毒A诱导的基因沉默及其条件优化

作     者：高阳 张永亮 张晓峰 韩成贵 于嘉林 李大伟 GAO Yang,ZHANG Yong-Liang,ZHANG Xiao-Feng,HAN Cheng-Gui,YU Jia-Lin,LI Da-Wei(State Key Laboratory of Agro-Biotechnology,College of Biological Sciences,China Agricultural University,Beijing 100193,China)

作者机构：中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100193 

出 版 物：《生物化学与生物物理进展》 (Progress In Biochemistry and Biophysics)

年 卷 期：2011年第38卷第10期

页      面：919-928页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 07[理学] 0703[理学-化学] 071005[理学-微生物学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30325001) 国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2006CB101903)~~ 

主　　题：烟草坏死病毒A 病毒诱导的基因沉默 条件优化 

摘      要：以烟草坏死病毒A中国分离物(Tobacco necrosis virus A Chinese isolate,TNV-AC)侵染性cDNA克隆为基础,通过基因替换、基因插入策略构建获得多种重组TNV-AC,比较了外源基因片段插入位置、插入形式及接种植物培养温度对TNV-AC诱导的基因沉默的影响.外源基因片段替换CP基因19～828 nt的重组TNV-AC丧失了在本生烟中的系统移动能力,也不能有效诱导相应基因发生明显的沉默,说明替换策略不适合于TNV-AC.向CP基因终止密码子UAG附近插入外源基因片段后,TNV-AC仍可进行复制,但最适的插入位点位于UAG之后,且容纳外源片段的长度约为120 nt.当外源片段以反向重复的形式插入UAG之后,诱导基因沉默的效率较高.接种植物的培养温度也会显著影响基因沉默的效率以及插入片段的稳定性,低温(18℃)条件下诱导NbPDS基因沉默的效率明显高于高温(24℃)条件,且沉默表型可持续110天以上.除了本生烟PDS基因,TNV-AC沉默载体还可诱导本生烟sulfur基因Su和镁离子螯合酶H亚基基因ChlH发生沉默,以上结果说明,TNV-AC具有开发为本生烟基因功能鉴定的新VIGS载体的潜力.