ShRNA靶向沉默VEGFR1基因对U937细胞增殖、迁移和凋亡的影响

作     者：修冰 黄滨滨 陈敬德 陆惠娜 秦伟 张文君 梁爱斌 XIU Bing;HUANG Bin-bin;CHEN Jing-de;LU Hui-na;QIN Wei;ZHANG Wen-jun;LIANG Ai-bin

作者机构：同济大学附属同济医院血液科上海200065 上海市浦东医院血液肿瘤科 

出 版 物：《中华血液学杂志》 (Chinese Journal of Hematology)

年 卷 期：2010年第31卷第10期

页      面：693-698页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30572161) 

主　　题：受体,血管内皮生长因子 RNA干扰 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡 

摘      要：目的 探讨慢病毒载体介导shRNA（short harpin RNA,siRNA前体）靶向沉默血管内皮生长因子受体1（VEGFR-1）基因对U937细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 构建针对VEGFR-1基因干扰序列和无关序列的shRNA慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染293T细胞,包装产生的病毒液感染U937细胞（U937-shVEGFR-1 KD组）.采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测RNA干扰对U937细胞VEGFR-1 mRNA和蛋白表达的影响;ELISA法检测细胞培养上清液VEGF表达水平的变化;CCK-8法检测常规培养条件下和不同浓度阿糖胞苷（Ara-C）作用下细胞增殖率和抑制率变化;流式细胞术检测经Ara-C作用后细胞凋亡率变化;Transwell小室检测不同条件下细胞迁移数量的变化.结果 成功构建VEGFR-1基因shRNA慢病毒载体,转染U937细胞后,U937-shVEGFR-1 KD组细胞VEGFR-1 mRNA和蛋白表达均显著下降;细胞培养上清液VEGF表达水平明显下降,细胞增殖速度减慢;Ara-C作用下,U937-shVEGFR-1 KD组细胞增殖抑制率及凋亡率较U937无关序列shRNA阴性对照（NC）组和U937空白对照（CON）组细胞明显增高.无药物及VEGF作用下,U937-shVEGFR-1 KD组细胞迁移数量均低于U937 NC组和U937 CON组细胞;Bevacizumab作用下,U937 NC组和U937 CON组细胞迁移数量降低,而U937-shVEGFR-1 KD组细胞迁移数量无明显变化.结论 慢病毒载体介导的shRNA干扰VEGFR-1基因可有效抑制U937细胞增殖、迁移,并能够增强U937细胞对Ara-C的敏感性.