DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响

作     者：李娜 苗聪秀 毕慧玲 苗卉 李丹 李敏 LI Na;MIAO Cong-xiu;BI Hui-ling;MIAO Hui;LI Dan;LI Min

作者机构：长治医学院附属和平医院生殖遗传科/山西省卫健委生殖工程委级重点实验室/长治医学院生殖遗传研究所山西长治046000 

出 版 物：《中华男科学杂志》 (National Journal of Andrology)

年 卷 期：2022年第28卷第5期

页      面：395-401页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

基　　金：国家自然科学基金(31971073) 山西省自然科学基金(201901D111325) 山西省卫健委科研项目(2017162) 

主　　题：DNA甲基转移酶1 精原干细胞 分化 小鼠 

摘      要：目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响。方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组、DNMT1-NC组,另取未转染细胞命名为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western印迹检测转染24 h后各组DNMT1 mRNA和蛋白表达水平,并检测转染后细胞基因组甲基化水平。干细胞生长因子诱导SSC向精母细胞方向分化,采用RT-qPCR法和Western印迹检测诱导分化48 h生殖细胞增殖相关蛋白(Nanos2)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、维甲酸刺激蛋白(Stra8)mRNA和蛋白表达水平。结果:转染24 h后,DNMT1-Si组DNMT1 mRNA(0.13±0.03)和蛋白相对表达量(0.44±0.08)、DNA甲基化水平[(14.16±2.62)%]均低于对照组[0.94±0.08、1.21±0.11、(27.15±3.54)%]和DNMT1-NC组[0.93±0.09、1.19±0.10、(26.85±3.55)%,P0.05)。分化48 h后,与对照组和DNMT1-NC组比较,DNMT1-Si组Nanos2、PLZF mRNA和蛋白相对表达量降低,Stra8 mRNA和蛋白相对表达量升高(P0.05)。结论:敲低DNMT1可促进小鼠SSC向精母细胞方向分化,其机制可能与降低基因组甲基化水平,抑制Nanos2、PLZF表达,促进Stra8表达有关。