牡荆苷对结肠癌移植瘤小鼠TAMs/CD8^(+)T细胞活性的调控作用

作     者：袁鑫 刘莹 梁健 刘华桢 侯少贞 赖小平 黄松 YUAN Xin;LIU Ying;LIANG Jian;LIU Huazhen;HOU Shaozhen;LAI Xiaoping;HUANG Song

作者机构：广州中医药大学第二附属医院广东广州510120 广州中医药大学广东广州510006 

出 版 物：《中药新药与临床药理》 (Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2022年第33卷第6期

页      面：754-761页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金项目(2019A1515012082) 广州中医药大学“双一流”大学建设重点培育项目(2020年) 

主　　题：牡荆苷 结肠癌 肿瘤微环境 肿瘤相关巨噬细胞 CD8^(+)T淋巴细胞 小鼠 

摘      要：目的探讨牡荆苷(Vitexin,VIT)作用于肿瘤相关巨噬细胞及细胞毒性T淋巴细胞(TAMs/CD8^(+)T)的抗结肠癌作用机制。方法采用BALB/c雄性小鼠构建CT26结肠癌皮下移植瘤模型,造模成功后按肿瘤体积随机分为对照组及牡荆苷高、低剂量组(40、20 mg·kg^(-1));每天1次,连续灌胃给药14 d,对照组给予等体积蒸馏水,每3 d测量1次肿瘤体积。给药结束后剖取小鼠肿瘤、脾脏和胸腺称定质量,并采用HE染色法对肿瘤和脾脏进行组织病理学检查;采用免疫荧光法分析肿瘤组织中TAMs表型;流式细胞术分析小鼠肿瘤和脾脏组织中的CD8^(+)细胞数量。选择RAW264.7巨噬细胞模型,采用MTT法检测牡荆苷对细胞活性的影响;以牡荆苷单独(5、10μmol·L^(-1))或分别联合脂多糖(LPS,100 ng·mL^(-1))、LPS+γ干扰素(INF-γ,100 ng·mL^(-1)+50 ng·mL^(-1))、白细胞介素4(IL-4,10 ng·mL^(-1))进行干预后,采用流式细胞术分析iNOS^(+)TAMs、CD206^(+)TAMs细胞比例;Griess法测定培养液中NO含量。结果在结肠癌移植瘤小鼠模型上,与对照组比较,牡荆苷高剂量组肿瘤体积增长明显减缓、肿瘤质量明显降低(P0.05);肿瘤组织中iNOS的表达明显升高(P0.05),iNOS/F4/80比率显著升高(P0.01);肿瘤和脾脏组织中CD3^(+)CD8^(+)T细胞占比明显升高(P0.05)。在RAW264.7细胞模型上,与对照组比较,LPS、LPS+IFN-γ干预组的iNOS^(+)TAMs计数和培养液中NO含量显著升高(P0.01,P0.001);IL-4干预组的CD206^(+)TAMs数量显著增加(P0.001)。与LPS干预组比较,牡荆苷+LPS干预组的iNOS^(+)TAMs计数和培养液中NO明显减少(P0.05,P0.01)。与LPS+INF-γ干预组比较,高剂量牡荆苷+LPS+IFN-γ组的iNOS^(+)细胞比例明显升高(P0.05),牡荆苷高、低剂量+LPS+IFN-γ干预组的NO含量明显增加(P0.05,P0.01)。与IL-4干预组比较,牡荆苷高剂量+IL-4组的CD206^(+)TAMs数量明显减少(P0.05)。结论在CT26结肠癌皮下移植瘤小鼠模型上牡荆苷可作用于肿瘤微环境促进iNOS^(+)TAMs极化,激活CD8^(+)T细胞发挥抗肿瘤作用。