不同时间点应用甲氨蝶呤对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

作     者：方超 徐祝军 杨民 谢加兵 李全辉 FANG Chao;XU Zhujun;YANG Min;XIE Jiabing;LI Quanhui

作者机构：皖南医学院弋矶山医院创伤骨科安徽芜湖241000 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2016年第30卷第4期

页      面：466-472页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：皖南医学院中青年科研基金自然科学类项目(WK2015F13) 皖南医学院重点科研项目培育基金(WK2014ZF14)~~ 

主　　题：脊髓损伤 甲氨蝶呤 低剂量 预防 凋亡 大鼠 

摘      要：目的探讨不同时间点应用低剂量甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后神经细胞凋亡的作用,探讨其潜在的神经保护机制与合适的给药时机。方法取成年雄性SD大鼠120只,体质量247-286 g,随机分为4组（n=30）,分别为假手术组（A组）、对照组（B组）、MTX治疗组（C组）和MTX预防组（D组）。A组仅行椎板切除,B、C、D组采用改良Allen法制备SCI模型;C组于术后1、6、12、18、24 h,D组于术前30 min及术后6、12、18、24 h,经尾静脉注射MTX（0.5 mg/kg）;A、B组于术后1、6、12、18、24 h注射等量生理盐水。术后观察大鼠一般情况,于1、3、7、14、21 d采用BBB评分进行神经功能评估;取材行组织学观察脊髓形态学变化,免疫组织化学染色观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）表达,TUNEL标记观察细胞凋亡水平。结果 B、C、D组实验过程中共死亡10只大鼠,最终各组纳入25只大鼠进行观察。各时间点A组BBB评分均高于B、C、D组（P〈0.05）,从3 d开始C、D组评分明显高于B组（P〈0.05）;D组从3 d开始均高于C组,除21 d（P〉0.05）外,其余各时间点比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。组织学观察示,A组术后各时间点脊髓组织为正常结构;D组SCI程度轻于B、C组,C组轻于B组;从14 d开始,B、C、D组病变范围基本固定。各时间点B、C、D组Caspase-3及TUNEL阳性细胞数均显著多于A组,B组多于C、D组,比较差异有统计学意义（P〈0.05）;C组Caspase-3阳性细胞数均多于D组,其中3、7、14 d比较差异有统计学意义（P〈0.05）,而TUNEL阳性细胞数仅3、7 d显著多于D组（P〈0.05）。术后1、3、7、14、21 d,B、C、D组组内Caspase-3、TUNEL阳性细胞数均成正相关（P〈0.05）。结论低剂量MTX能够通过抑制神经细胞凋亡有效阻止SCI的继发性损伤;预防性应用MTX效果优于单纯治疗性应用。