结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64单克隆抗体的制备及其特异性

作     者：谢燕玲 宁唤唤 梁璇 康健 任瑞 张慧 张娜娜 路延之 柏银兰 XIE Yan-ling;NING Huan-huan;LIANG Xuan;KANG Jian;REN Rui;ZHANG Hui;ZHANG Na-na;LU Yan-zhi;BAI Yin-lan

作者机构：延安大学生命科学学院延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 西安培华学院医学院西安710065 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2022年第38卷第5期

页      面：387-393页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家“十三五”重大传染病专项课题(No.2018ZX10302302002004) 国家自然科学基金面上项目(No.81971560,No.81671638)联合资助 

主　　题：结核分枝杆菌 MPT64 分泌蛋白 单克隆抗体 

摘      要：目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并分析mAb的特异性。方法PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白。重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系。以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb。ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性。结果本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了MPT64蛋白。亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白。该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2。中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb。该mAb的亲和力为2.813×10^(-7) g/mL,属于IgG 1亚类。MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白。结论本研究制备了MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础。