羊驼噬菌体展示纳米抗体库中 Le^(a) 模拟抗原表位筛选与鉴定的初步研究

作     者：钟晓龙 杨璐 张洁 孙莉萍 马铭梓 樊斌 尚玮 黄远帅 汪德清 ZHONG Xiao-Long;YANG Lu;ZHANG Jie;SUN Li-Ping;MA Ming-Zi;FAN Bin;SHANG Wei;HUANG Yuan-Shuai;WANG De-Qing

作者机构：西南医科大学附属医院输血科四川泸州646000 中国人民解放军总医院第一医学中心输血医学科北京100853 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2022年第30卷第3期

页      面：877-883页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

基　　金：中国人民解放军总医院创新计划项目(NO.CX19006) 

主　　题：模拟表位 羊驼噬菌体纳米抗体库 Le^(a)抗原 

摘      要：目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法,即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位,并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a(Le^(a))抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Le^(a)抗原的模拟表位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对阳性克隆菌与筛选原Le^(a)单克隆抗体的亲和力进行检测,选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序,并对最终确定的序列进行表达合成。最后通过ELISA法对合成后的Le^(a)模拟抗原进行灵敏度、特异度以及临床样本的验证。结果:随机挑取96个噬菌体克隆,有24个阳性克隆,并选取亲和力最强的前14个噬菌体克隆进行测序,结果显示有5个不同序列,选取出现频率最高、差异最大、亲和力最高的3条序列进行表达合成。利用ELISA法检测筛选得到的Le^(a)模拟抗原的灵敏度及特异性,发现微柱凝胶法与ELISA法的最低检出限相差25倍,且Le^(a)模拟抗原与其他5种单抗(anti-A,anti-B,anti-P1,anti-M,anti-N)没有交叉反应(P0.001)。最后,检测了30例临床血浆样本(15例Le^(a+),15例Le^(a-)),结果显示,15例阳性血浆样本的吸光度的均值高于阴性血浆样本,且具有统计学差异(P=0.02),但临床样本的阳性信号值远低于单抗的阳性信号值。结论:初步建立了利用羊驼噬菌体纳米抗体库筛选Le^(a)模拟抗原的方法,有望实现Le^(a)模拟抗原表位的筛选,从而实现ELISA、化学发光等高灵敏度检测方法在血型抗体鉴定方面的应用。