不同核酸提取方法用于环介导等温扩增检测大西洋鲑鱼的比较分析

作     者：李秋萍 许文杰 崔晓文 操敏 熊晓辉 熊雄 LI Qiuping;XU Wenjie;CUI Xiaowen;CAO Min;XIONG Xiaohui;XIONG Xiong

作者机构：南京工业大学食品与轻工学院江苏南京211816 江苏省食品安全快速检测公共技术服务中心江苏南京211816 

出 版 物：《食品与发酵工业》 (Food and Fermentation Industries)

年 卷 期：2022年第48卷第10期

页      面：240-246,254页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083204[工学-水产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家自然科学青年基金项目(31701668)。 

主　　题：环介导等温扩增 大西洋鲑鱼 核酸提取 灵敏度 

摘      要：环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)已被广泛应用于鱼类真伪鉴定。LAMP扩增成功的重要前提是获得高质量的核酸。目前为止,DNA提取方法种类繁多,但对适用于LAMP的提取方法缺乏全面的研究。该研究采用十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)、Tagliavia、Heating以及2种常用市售试剂盒(Takara,Tiangen),对4种前处理的大西洋鲑鱼组织进行DNA提取,并对DNA得率、纯度、LAMP等方面进行比较分析。结果表明,这5种提取方法从不同前处理的样品中获得的DNA均可用于LAMP反应,采用琼脂糖凝胶电泳及荧光可视化检测都可观测到阳性结果。但在实时LAMP检测中,不同提取方法和不同样品前处理方式的Ct值均存在着极显著差异(P0.01)。SDS和Tiangen这2种提取方法虽然DNA得率较低,但可获得高纯度的DNA,并在LAMP反应中有着更低的检测限。该研究结果为大西洋鲑鱼组DNA的提取和检测以及适用于LAMP技术的不同提取方法的研究提供了参考依据。