酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的分离纯化及其酶学性质

作     者：徐勤茜 朱国威 赵梓伶 陶雪婷 李子院 郝再彬 李海云 XU Qinqian;ZHU Guowei;ZHAO Ziling;TAO Xueting;LI Ziyuan;HAO Zaibin;LI Haiyun

作者机构：桂林理工大学化学与生物工程学院广西桂林541004 广西高校食品安全与检测重点实验室广西桂林541004 

出 版 物：《食品工业科技》 (Science and Technology of Food Industry)

年 卷 期：2022年第43卷第11期

页      面：159-166页

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：广西科技基地和人才专项(桂科AD18050001) 国家自然科学基金项目(31460409) 广西自然科学基金(2016GXNSFAA380014) 

主　　题：酸橙 内生菌 几丁质酶 酶学性质 分离纯化 

摘      要：为揭示酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的基本酶学性质,采用离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对菌株Bt028发酵液中的几丁质酶进行分离纯化鉴定,并考察该几丁质酶的最适温度、最适pH、催化动力学参数等性质。结果表明,Bt028菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析分离纯化后获得电泳纯几丁质酶比活力为681.78 U/mg,纯化倍数为3.21,回收率15.52%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,几丁质酶的分子质量为65 kDa。酶学性质研究结果表明,该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.5,在温度低于60℃、pH5.5~7.5时有较好的稳定性;Mg^(2+)、Ca^(2+)、Hg^(2+)、Co^(2+)对该酶活力有抑制作用,而Cu^(2+)和Fe^(3+)有一定的促进作用;低浓度的甲醇、乙醇、正丙醇和二甲亚砜使酶的活性增加,但当浓度继续增大,反而会抑制酶的活性;丙酮对几丁质酶有激活作用,而甲醛对几丁质酶有抑制作用。在最适催化条件下,几丁质酶催化反应的米氏常数Km、最大反应速率Vmax、酶的转换数Kcat分别为29.533 mg/mL、108.696μmoL/(L·min)和0.527/min。研究结果可为该酶的实际应用提供必要的工艺参数。