全外显子测序发现CREBBP基因突变影响卵巢癌的发生机制

作     者：苏丹 郭晓霞 岳军 梅劼 Su Dan;Guo Xiaoxia;Yue Jun;Mei Jie

作者机构：四川省医学科学院·四川省人民医院妇产科成都610072 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2022年第57卷第5期

页      面：695-701页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：四川省科技厅项目(编号:2015SZ0243) 四川省卫计委项目(编号:17PJ240) 成都市科技局项目(编号:2019-YF05-00244-SN)。 

主　　题：浆液性卵巢癌 全外显子测序 CREBBP 基因突变 

摘      要：目的利用全外显子测序寻找与卵巢癌发生发展相关的分子靶标,并进行体外细胞实验验证其可能影响卵巢癌发生的机制。方法本研究通过对8对浆液性卵巢癌组织进行全外显子测序,验证实验进一步对另外43个浆液性卵巢癌组织和156位正常女性的外周血标本进行目的基因测序。在体外实验中用Lipofectamine 3000做载体,将含CREBBP基因L1850fs和P1373S突变的质粒转染人浆液性卵巢癌细胞株A2780,以含CREBBP野生型的质粒和空载体为对照,采用Western blot法检测CREBBP的L1850fs和P1373S突变对环磷腺苷效应元件(CREB)的结合蛋白(CBP)蛋白表达的影响;CCK-8检查L1850fs和P1373S突变对细胞增殖的影响;Transwell小室试验检测L1850fs和P1373S突变对细胞迁移的影响;划痕试验检测L1850fs和P1373S突变对细胞侵袭的影响。结果通过全外显子测序发现了浆液性卵巢癌的2个高频突变位点——CREBBP的L1850fs(c.5548dupC)和P1373S(c.4117CT)。L1850f是移码突变,P1373S是非同义序列。在51例浆液性卵巢癌病例中(全外显子测序8例,目的基因测序43例),CREBBP基因的突变率为41.2%,而正常女性外周血中突变率为21.8%,差异有统计学意义(χ^(2)=7.4,P=0.007)。Western blot结果显示,L1850fs突变能降低卵巢癌细胞中其相应CBP蛋白的表达,而P1373S突变对蛋白表达无影响。CCK-8分析表明,突变型CREBBP可促进卵巢癌细胞增殖。Transwell小室试验结果显示L1850fs和P1373S突变可促进卵巢癌细胞迁移。划痕试验分析表明,CREBBP基因突变可提高卵巢癌细胞侵袭能力。结论本实验通过全外显子测序发现了浆液性卵巢癌相关的两个点突变,CREBBP L1850fs和P1373S。进一步的细胞实验表明该突变可以通过影响CBP蛋白促进卵巢癌细胞增殖、侵袭、转移等,提示CREBBP L1850fs和P1373S可能成为卵巢癌诊断及治疗的新靶点。