慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响

作     者：钱伟峰 阮坚丽 高源 黄海 QIAN Wei-feng;Ruan Jian-li;GAO Yuan;Huang hai

作者机构：江苏省苏州市立医院本部普外科江苏苏州215002 江苏省苏州市立医院本部普内科江苏苏州215002 

出 版 物：《实用临床医药杂志》 (Journal of Clinical Medicine in Practice)

年 卷 期：2010年第14卷第10期

页      面：21-24页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：江苏省苏州市社会发展计划项目(SS08033) 

主　　题：慢病毒载体系统 shRNA 大肠癌细胞 STAT3 

摘      要：目的观察慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长的影响。方法将pRNAT-shSTAT3重组慢病毒质粒进行包装产生病毒液,测定其滴度,感染大肠癌HT-29细胞,筛选获得阳性细胞株,实时定量PCR和Westernblot检测shRNA对STAT3基因的沉默效率,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功包装慢病毒,其病毒悬液的滴度为2×107TU/mL。病毒液感染大肠癌HT-29细胞,经G418筛选获得稳定细胞株,实时定量PCR和Western blot结果分别显示HT-29细胞STAT3mRNA表达和蛋白明显减弱,表达量分别为(16.9±2.1)%、(18.8±2.4)%(P0.01)。MTT结果显示STAT3基因沉默后的大肠癌HT-29细胞生长明显减慢,G0/G1期细胞占(68.73±2.88)%,S期细胞占22.93±1.10%,与对照组相比差异显著(P0.01)。结论慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对大肠癌HT-29细胞生长有明显的影响,细胞生长速度明显减慢,细胞阻滞于G0/G1期。