基于TLR4信号通路研究小檗碱对血管紧张素Ⅱ诱导ANA-1细胞炎性应答的影响

作     者：高德兴 贾沛芝 彭军 林炜 GAO Dexing;JIA Peizhi;PENG Jun;LIN Wei

作者机构：福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 

出 版 物：《康复学报》 (Rehabilitation Medicine)

年 卷 期：2022年第32卷第2期

页      面：140-148页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(82074363) 福建省科技重大专项项目(2019YZ014004) 陈可冀科研基金项目(CKJ2020006) 

主　　题：小檗碱 TLR4信号通路 血管紧张素Ⅱ 炎性应答 

摘      要：目的:研究小檗碱(BBR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法:对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组。对照组、荧光抗体组均加入2.5μL二甲基亚砜(DMSO);模型组加入浓度为1μmol/L AngⅡ工作液;低、中、高剂量BBR组分别加入浓度为1、5、10μmol/L BBR工作液;抑制剂组加入浓度为10μmol/L TAK242工作液。采用细胞增殖与毒性检测实验(CCK-8)方法检测不同浓度的BBR对细胞活力的影响;采用流式细胞术检测细胞膜表面TLR4的平均荧光强度(MFI);采用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平;采用Western blot检测p-ERK/ERK、p-p38/p38、pJNK/JNK、p-p65/p65、p-IRF3/IRF3的磷酸化及TLR4、MyD88、AP-1的表达情况;采用生化法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:(1)CCK-8法检测结果:与对照组比较,低、中、高剂量BBR组细胞活性均无明显区别,差异无统计学意义(P0.05)。(2)流式细胞术检测结果:与荧光抗体组比,模型组MFI明显减弱;与模型组比较,模型+高剂量BBR组MFI明显增强,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)ELISA检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。(4)实时定量PCR法检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平均明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)Western blot结果:与对照组比较,模型组处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量BBR组p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显下降。与对照组比较,模型组处理15 min后ERK、p38蛋白磷酸化表达明显升高,处理30 min后JNK蛋白的磷酸化表达明显升高,处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,而模型+高剂量BBR组与模型+抑制组p65、IRF-3、ERK、p38、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降。与对照组比较,模型组处理12 h后TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量BBR组TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达均明显下降。与对照组比较,模型组处理12 h后TLR4、p-p65的表达明显升高,而模型+高剂量BBR组、模型+抑制剂组、模型+抑制剂+高剂量BBR组的TLR4、p-p65蛋白的表达均明显下降。(6)生化检测结果:与对照组比较,模型组MDA含量明显升高,SOD活力明显下降,差异具有统计学意义(P0.05),模型+低、中、高剂量BBR组MDA含量明显下降,SOD活力明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:BBR能够调控TLR4信号通路,抑制由AngⅡ诱导TLR4信号通路的异常激活和NF-κB、MAPK信号转导,降低促炎因子的水平,调控炎性应答;此外,BBR还能够改善AngⅡ诱导ANA-1细胞的脂质过氧化程度及抗氧化能力,降低AngⅡ造成的氧化应激损伤,保护ANA-1细胞。