Notch1高表达可使钙化的人心脏瓣膜间质细胞骨形态发生蛋白-2、4表达增加

作     者：凌秋洋 刘洁 徐佰达 吴婷 叶挺 宗刚军 Ling Qiuyang;Liu Jie;Xu Baida;Wu Ting;Ye Ting;Zong Gangjun

作者机构：解放军第一○一医院心血管内科无锡214044 

出 版 物：《中华心血管病杂志》 (Chinese Journal of Cardiology)

年 卷 期：2016年第44卷第3期

页      面：255-259页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81371657) 

主　　题：心脏瓣膜疾病 受体,Notch1 NF--κB 

摘      要：目的 观察钙化的人心脏瓣膜间质细胞（hVIC） Notch1蛋白表达的变化及其对细胞钙化的影响,并探讨其机制.方法 体外培养hVIC,将其分为2组,分别为正常对照组和诱导钙化组,前者常规培养,后者在常规培养的基础上加用β-甘油磷酸（500μl）、抗坏血酸（200μl）和地塞米松（100μl）以诱导细胞钙化,2组细胞均培养7d.另取上述方法诱导钙化的hVIC为钙化对照组,再设钙化抑制组,即为在钙化对照组的基础上加入Notch1特异性抑制剂DAPT 50 μmol/L（4μl/孔）,2组细胞均培养7d.4组均用脂多糖（LPS）诱导细胞的炎症反应.采用蛋白印迹法检测各组细胞内Notch1、磷酸化核转录因子κB （p-NF-κB）、骨形态发生蛋白（BMP）-2和BMP4的蛋白表达水平,ELISA法测定各组细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量,Von Kossa染色法观察各组细胞钙化的情况.结果 （1）诱导钙化组和正常对照组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2、BMP4蛋白表达和细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量以及Von Kossa染色结果：诱导钙化组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2和BMP-4蛋白表达水平均明显高于正常对照组（P均0.05）.诱导钙化组培养液上清中BMP-2蛋白含量为（88.23±3.28） pg/ml明显高于正常对照组的（25.41 ±3.68） pg/ml（P=0.02）.Von Kossa染色可见诱导钙化组细胞形成大小不等的结节,胞质内的沉积物与细胞结节被染成黑色,提示有钙质沉积,而正常对照组细胞形态结构清晰,细胞周围无沉积物形成.（2）钙化对照组和钙化抑制组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2、BMP-4蛋白表达和细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量以及Von Kossa染色结果：钙化抑制组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2和BMP4蛋白的表达水平均明显低于钙化对照组（P均0.05）,钙化抑制组培养液上清中BMP-2蛋白的含量为（26.74±4.62） pg/ml明显低于钙化对照组的（80.41 ±2.96） pg/ml （P=0.02）.Von Kossa染色可见钙化抑制组细胞钙结节明显少于钙化对照组.结论 钙化的hVIC Notch1蛋白高表达,促进了BMP-2和BMP-4蛋白表达增加,从而使hVIC发生成骨样改变,诱导细胞钙化,这一机制可能与NF-κB的活化有关.