罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立

作     者：徐淑菲 朱黄鑫 曾韵颖 刘启霖 方成俊 林双庆 孔凡德 XU Shufei;ZHU Huangxin;ZENG Yunying;LIU Qilin;FANG Chengjun;LIN Shuangqing;KONG Fande

作者机构：厦门海关技术中心福建厦门361026 东山海关综合技术服务中心福建漳州363401 

出 版 物：《渔业研究》 (Journal of Fisheries Research)

年 卷 期：2022年第44卷第2期

页      面：154-161页

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：福建省引导性项目(2019N0030) 

主　　题：罗湖病毒(TiLV) 特异性引物 探针 实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR) 

摘      要：研究根据罗湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)编码RNA聚合酶的基因片段1设计1对特异性引物和探针,建立一种检测TiLV的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,并对该检测方法进行了反应体系和条件优化。结果表明,优化的20μL反应体系:2×Probe RT-PCR Master Mix 10μL,QN Probe RT-Mix 0.2μL,5μmol/L的引物TiLV-qF、TiLV-qR、探针TiLV-qP各1μL,模板1μL,补充RNase-free water至20μL。优化的反应条件:反转录45℃20 min;预变性95℃5 min;扩增95℃15 s,60℃1 min,40个循环。荧光收集设置在60℃退火延伸时进行。本文建立的RT-qPCR方法检测TiLV的特异性好,重复性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×10^(-8) ng/μL,可为TiLV的监测和预防提供技术支撑。