克氏原螯虾Rab5、Rab6蛋白表达及其抗体对血淋巴细胞吞噬活性的影响
Protein expression and antibody preparation of Rab5 and Rab6 in Procambarus clarkii and their effects on phagocytic activity of haemocytes作者机构：河南师范大学水产学院
出 版 物：《水生生物学报》 (Acta Hydrobiologica Sinica)
年 卷 期：2022年
核心收录：
基 金：河南省自然科学基金（212300410177） 河南省重点科技攻关项目（212102110107）资助
摘 要：Rab5、Rab6蛋白是真核细胞囊泡运输的主要调控分子，在吞噬体形成过程中发挥关键调控作用。为研究克氏原螯虾（Procambarus clarkii）Rab5（PcRab5）和Rab6（PcRab6）的生物学功能，本研究利用同源重组技术构建了克氏原螯虾pET-B2m-PcRab5、pET-B2m-PcRab6原核表达载体，并进行了诱导表达和多克隆抗体的制备，采用ELISA和Western Blot技术检测了抗体效价和特异性。将PcRab5、PcRab6的原核表达蛋白和多克隆抗体注射健康克氏原螯虾体内，研究了其对血淋巴细胞吞噬活性的影响。实验结果表明构建的pET-B2m-PcRab5、pET-B2m-PcRab6原核表达载体经诱导后可表达目的蛋白，分子量均为67 kDa，纯化后蛋白条带单一，纯度较高。重组表达纯化后的PcRab5、PcRab6蛋白免疫日本大耳兔分别获得效价为1：2048 K和1：512 K的兔抗血清，制备的抗体可分别特异性识别PcRab5、PcRab6蛋白。将PcRab5、PcRab6蛋白注射健康克氏原螯虾后，其血淋巴细胞中可吞噬荧光微球的细胞比例分别显著上升至38%和30%（P0.01）。而将纯化的PcRab5、PcRab6多克隆抗体分别注射至螯虾体内后，其血淋巴细胞的吞噬细胞比例均出现显著下降（P0.05）。本研究制备了PcRab5、PcRab6原核蛋白和多克隆抗体，基于该抗体的吞噬实验结果表明，PcRab5、PcRab6蛋白参与了血淋巴细胞吞噬功能。本文可为进一步研究克氏原螯虾PcRab5、PcRab6分子功能奠定基础，也可为理解甲壳动物Rab5、Rab6在血淋巴细胞吞噬功能中的作用提供帮助。
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