鲢鱼背肌组织蛋白酶L的初步分离及蛋白层析纯化方法

作     者：王谦 焦熙栋 闫博文 孟令璐 曹洪伟 黄建联 赵建新 张灏 陈卫 范大明 Wang Qian;Jiao Xidong;Yan Bowen;Meng Linglu;Cao Hongwei;Huang Jianlian;Zhao Jianxin;Zhang Hao;Chen Wei;Fan Daming

作者机构：江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 农业农村部冷冻与调理水产品加工重点实验室福建厦门361022 江南大学食品学院江苏无锡214122 福建省冷冻调理水产品加工重点实验室福建厦门361022 福建安井食品股份有限公司福建厦门361022 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2022年第22卷第3期

页      面：111-119页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083204[工学-水产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家“十三五”重点研发计划项目(2019YFD 0902000) 国家自然科学基金项目(31822038) 厦门市第二批重大科技项目(3502Z20201032) 食品科学与工程一流学科建设项目(JUFSTR20180102) “江苏省食品安全与质量控制协同创新中心”项目 

主　　题：鲢鱼 组织蛋白酶L 初步分离 蛋白层析 

摘      要：研究鲢鱼背肌中组织蛋白酶L的初步分离和纯化方法,重点研究初步分离过程中酸化处理条件、硫酸铵饱和度和透析袋分子质量对粗酶液中组织蛋白酶L活性的影响,以及纯化过程中不同类型离子交换层析柱和离子交换平衡缓冲液pH值对蛋白层析纯化的影响。结果表明:盐析最佳硫酸铵饱和度范围55%~90%,酸处理最优条件pH 3.0,40℃热处理10 min后pH值回调至6.0,透析袋最佳分子质量7000 u。采用弱阴离子交换和分子筛两步层析法,选取20 mmol/L、pH 6.0磷酸盐缓冲液作为弱阴离子柱的平衡缓冲液,可得到45 ku电泳纯组织蛋白酶L,其纯化倍数为487,回收率为22 mg/1000 g。本法可最大限度地去除杂蛋白且操作简便、回收率高,为探究鱼糜凝胶劣化现象的有效抑制方法奠定了良好的基础。