Txt5腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达

作     者：彭浩 陈宇 李佑锋 朱旋 周作琼 吴秀山 范雄伟 李永青 PENG Hao;CHEN Yu;LI You-feng;ZHU Xuan;ZHOU Zuo-qiong;WU Xiu-shan;FAN Xiong-wei;LI Yong-qing

作者机构：湖南师范大学心脏发育研究中心蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室湖南长沙410081 

出 版 物：《怀化学院学报》 (Journal of Huaihua University)

年 卷 期：2015年第34卷第5期

页      面：45-48页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81270156 81400304 81470377) 湖南省社会发展支撑计划项目(2014SK3009 2015JJ3087) 湖南省生物发育工程及新产品研发协同创新中心(2013-448-6) 

主　　题：腺病毒 Txt5 心肌细胞 

摘      要：设计小鼠Txt5基因的特异性引物,将小鼠c DNA作为模板,用PCR扩增出m Txt5编码区,并加入HA标签序列.将这一片段插入p MD-18T载体,再亚克隆至p Adtrack-cmv穿梭载体上.线性化后,转化BJ5183感受态细胞,在BJ5183中发生同源重组获得p Ad-Txt5质粒.p Ad-Txt5线性化后转染293A细胞,包装得到含Txt5基因的病毒.将病毒溶液感染大鼠原代心肌细胞,一段时间后观察绿色荧光,然后通过RT-PCR和免疫印迹法检测HA标签蛋白的表达.结果表明成功构建小鼠Txt5腺病毒表达载体并实现在大鼠原代心肌细胞中的表达.