一氧化氮供体JS-K联合阿司匹林促进人肝细胞癌细胞凋亡

作     者：邢一浩 杨成 铁妍 贾雪珂 徐静蕾 刘玲 XING Yi-hao;YANG Cheng;TIE Yan;JIA Xue-ke;XU Jing-lei;LIU Ling

作者机构：河南科技大学基础医学院河南洛阳471003 

出 版 物：《中国药理学与毒理学杂志》 (Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology)

年 卷 期：2022年第36卷第2期

页      面：108-114页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：河南省科技攻关项目(202102310439) 

主　　题：JS-K 阿司匹林 肝细胞癌 一氧化氮 细胞凋亡 

摘      要：目的研究一氧化氮供体(JS-K)与阿司匹林联合用药协同诱导人肝细胞癌(肝癌)HepG2和SMMC7721细胞凋亡的作用。方法人肝癌HepG2和SMMC7721细胞分别设立细胞对照组(只加等量二甲亚砜,终浓度0.01%)、JS-K 5μmol·L^(-1)组、阿司匹林5,10和20 mmol·L^(-1)组、JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林5,10,20 mmol·L^(-1)组。MTT法检测细胞增殖抑制率并计算联合用药指数(CI);倒置显微镜下观察细胞形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率。2种细胞分为6组:细胞对照、JS-K 5μmol·L^(-1)、阿司匹林20 mmo·L^(-1)、Z-VAD-FMK 50μmol·L^(-1)、JS-K+阿司匹林和JS-K+阿司匹林+Z-VAD-FMK组,给药后处理24 h。DAPI染色观察细胞核形态变化;Western印迹法检测活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达。结果与JS-K 5μmol·L^(-1)组比较,JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林5,10和20 mmol·L^(-1)组HepG2和SMMC7721细胞增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),且具有一定的协同作用(CI1)。JS-K 5μmol·L^(-1)组、阿司匹林5,10和20 mmol·L^(-1)组、JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林5,10和20 mmol·L^(-1)组细胞扁圆,生长迟缓,形态不规则,脱落并悬浮于培养液中。与JS-K 5μmol·L^(-1)组比较,JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林5,10,20 mmol·L^(-1)组细胞凋亡率显著升高(P0.05,P0.01)。DAPI染色结果显示,与JS-K 5μmol·L^(-1)单药组或阿司匹林20 mmol·L^(-1)单药组比较,JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林20 mmol·L^(-1)组细胞核染色质高度凝聚、边缘化,核碎裂等凋亡样特征更加明显,活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化PARP蛋白表达显著上调(P0.05,P0.01)。与JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林20 mmol·L^(-1)组比较,JS-K 5μmol·L^(-1)+阿司匹林20 mmol·L^(-1)+Z-VAD-FMK 50μmol·L^(-1)组细胞核染色质高度凝聚、边缘化,核碎裂等凋亡特征减少,活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化PARP蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01)。结论JS-K与阿司匹林联用具有协同抑制HepG2和SMMC7721细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用机制与激活胱天蛋白酶诱导的凋亡级联反应有关.