基于单核细胞增生李斯特菌actA基因的环介导等温扩增技术快速检测方法的建立

作     者：胡仲皓 单兴根 何晓花 吴金节 胡青海 HU Zhong-hao;SHAN Xing-gen;HE Xiao-hua;WU Jin-jie;HU Qing-hai

作者机构：安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第44卷第1期

页      面：47-52页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2018YFD0500500) 

主　　题：食源性致病菌 单增李斯特菌 环介导等温扩增技术(LAMP) actA基因 可视化检测 

摘      要：单核细胞增生李斯特菌(Lm)是主要的食源性致病菌之一,也是一种重要的人畜共患病原菌,感染人和动物后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多症等。为建立快速检测Lm的方法,本研究以Lm毒力因子actA作为特异性检测的靶基因,通过条件优化初步建立了快速检测食源性Lm的环介导等温扩增(LAMP)方法。并采用该方法进行了特异性、敏感性及临床样品检测试验。结果显示,利用建立的LAMP方法检测Lm、肠出血性大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌、产气荚膜梭菌、空肠弯曲菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪丹毒丝菌或支气管败血波氏杆菌基因组DNA,除Lm为阳性外,其他病原菌均为阴性,表明该方法的特异性较强;将Lm菌液10倍倍比稀释为4.7×10^(9)cfu/mL~4.7×10^(0)cfu/mL,再采用该LAMP方法和常规PCR方法进行检测,结果显示,LAMP对Lm的检测下限为4.7×10^(1)cfu/mL,而常规PCR对Lm的检测下限为4.7×10^(3)cfu/mL,即LAMP比普通PCR的敏感性高100倍,表明本研究建立的LAMP方法敏感性较高;采用建立的LAMP方法对118份猪肉临床样品进行检测,结果显示有3份样品为阳性,与常规PCR和国标的检测结果均一致。本研究基于Lm actA基因建立了Lm LAMP检测方法,且该方法具有特异性强、敏感性高、结果可视等优点,适用于实验室和基层食品安全监管部门的现场快速检测。