北柴胡糖基转移酶基因BcUGT8的克隆、序列分析及其原核表达载体构建

作     者：徐洁森 魏建和 陶韵文 孙晶 隋春 

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193 佳木斯大学药学院黑龙江佳木斯154007 东北林业大学生命科学院黑龙江哈尔滨150040 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2013年第44卷第17期

页      面：2453-2459页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81072994) 北京市自然科学基金资助项目(5102033) 中医药行业科研专项(201107011) 

主　　题：北柴胡 糖基转移酶基因 序列分析 原核表达载体 PCR 

摘      要：目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。