三氧化二砷对维甲酸耐药的神经母细胞瘤细胞SK-N-AS中HoxC9表达的影响

作     者：邬萍萍 冯楚础 熊稀霖 李春谋 彭晓敏 王智轩 黎阳 WU Pingping;FENG Chuchu;XIONG Xilin;LI Chunmou;PENG Xiaomin;WANG Zhixuan;LI Yang

作者机构：中山大学孙逸仙纪念医院儿科肿瘤专科广州510030 

出 版 物：《中国小儿血液与肿瘤杂志》 (Journal of China Pediatric Blood and Cancer)

年 卷 期：2022年第27卷第1期

页      面：12-17页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金项目(2017A030313806,2020A1515010127) 中山大学孙逸仙纪念医院“逸仙临床研究培育项目”(SYS-C-202007) 

主　　题：神经母细胞瘤 三氧化二砷 维甲酸耐药 HoxC9 

摘      要：目的本研究通过检测三氧化二砷(ATO)处理前后维甲酸(RA)耐药的SK-N-AS细胞中HoxC9以及EZH2的表达,初步探寻ATO促进RA耐药的NB细胞分化的具体机制。方法用CCK-8试剂盒测定ATO对NB细胞SK-N-AS增殖抑制率,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,并测量神经突触总长度值。利用质谱技术和非标定量蛋白组学方法检测ATO处理后SK-N-AS细胞蛋白信号丰度变化,并对与NB细胞分化相关蛋白进行差异化分析。Western Blot检测HoxC9、HoxD8及EZH2蛋白的表达情况。结果(1)ATO对SK-N-AS细胞的杀伤作用在4~128μM范围内呈浓度依赖性,ATO对SK-N-AS细胞的半抑制浓度IC50=95.36μM。(2)16μM的ATO处理SK-N-AS细胞24h后,神经突触总长度值升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。(3)16μM ATO处理24h后,SK-N-AS细胞内共鉴定到6424个表达蛋白,其中与分化相关的蛋白,上调的包括正常神经元分化标记物MAPT、NEFM等;下调的包括神经母细胞成瘤性标记物PHOX2B。(4)Western Blot结果表明,16μM ATO处理SK-N-AS细胞24h后,HoxC9、HoxD8蛋白的表达水平上调,EZH2蛋白表达水平下调。结论(1)ATO可诱导SK-N-AS细胞的神经突触增多,上调SK-N-AS细胞中神经元正常分化相关的标记物HoxC9及HoxD8的表达,下调神经母细胞成瘤性标记物PHOX2B及EZH2。(2)ATO可能通过下调EZH2重新激活HoxC9的表达。