氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响

作     者：张苏阳 邢云天 袁轩 曲国立 姚甲凯 戴建荣 ZHANG Su-yang;XING Yun-tian;YUAN Xuan;QU Guo-li;YAO Jia-kai;DAI Jian-rong

作者机构：江苏省血吸虫病防治研究所国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室无锡214064 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2022年第40卷第1期

页      面：61-67页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2020YFC1200100) 

主　　题：光滑双脐螺 氯硝柳胺 线粒体膜电位 氧化磷酸化 

摘      要：目的研究氯硝柳胺对光滑双脐螺氧化磷酸化的影响,探讨氯硝柳胺的杀螺机制。方法用线粒体提取试剂盒提取光滑双脐螺成螺线粒体,考马斯蓝染色法检测提取线粒体蛋白含量,用线粒体复合体Ⅳ活性检测试剂盒检测提取过程中组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中复合体Ⅳ活性以评价提取线粒体的纯度。用线粒体复合物活性检测试剂盒提取光滑双脐螺的线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ,每种复合物各分成0.2μg/ml、1.0μg/ml组和二甲基亚砜(DMSO)组,分别加入终浓度为0.2和1.0μg/ml的氯硝柳胺、0.5%DMSO,分别测定不同波长处的吸光度(A值),计算复合体的活力值。在96孔板中每孔加入蛋白浓度为33μg/ml的线粒体悬液,分别加入终浓度为0.2和1.0μg/ml的氯硝柳胺(0.2μg/ml组和1.0μg/ml组)或0.5%DMSO (DMSO组),测定25℃条件下10、20、30 min的A;值,计算线粒体膜通透性转运孔(m PTP)开放度。在96孔板中每孔加入含终浓度为5μg/ml的JC-1染料、蛋白浓度为0.1 mg/ml的线粒体悬液,0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/ml组分别加入终浓度为0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μg/ml的氯硝柳胺,氰化羰基-3-氯苯腙(CCCP)组加入20μg/ml的CCCP作阳性对照组,DMSO组加入0.5%的DMSO作阴性对照组,在激发光485 nm、发射光590 nm、25℃条件下连续检测荧光强度30 min。组间比较采用单因素方差分析。结果提取获得的线粒体总蛋白浓度为(4.24±0.11) mg/ml,组织破碎液、丢弃上清和线粒体悬液中电子传递链复合物Ⅳ活性分别为(14.88±1.80)、(5.60±0.96)、(24.19±3.53) U/mg,3组间差异有统计学意义(F=46.922,P0.05)。加入氯硝柳胺10 min时,0.2μg/ml组、1.0μg/ml组和DMSO组mPTP开放度分别为(0.040±0.005)、(0.041±0.002)、(0.039±0.036);加入20 min时分别为(0.069±0.008)、(0.067±0.002)、(0.065±0.015);加入30 min时分别为(0.090±0.009)、(0.088±0.002)、(0.087±0.012)。加入氯硝柳胺10、20、30 min,0.2μg/ml组、1.0μg/ml组与DMSO组mPTP开放度差异均无统计学意义(F=0.025、0.094、0.060,P0.05)。相对于DMSO组(1.000),在加入氯硝柳胺15 min时0.6、0.8和1.0μg/ml组的线粒体膜电位分别为(0.874±0.008)、(0.843±0.018)、(0.773±0.027),均低于DMSO组(F=44.285,P0.05);加入30 min时,0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μg/ml组的线粒体膜电位分别为(0.951±0.051)、(0.886±0.022)、(0.766±0.019)、(0.746±0.016)、(0.675±0.021),除0.2μg/ml组,其余各组均低于DMSO组(F=125.738,P0.01)。结论浓度低于1.0μg/ml的氯硝柳胺对光滑双脐螺线粒体电子传递链复合物活性无影响,也未造成线粒体膜通透性转运孔的开放,但可引起光滑双脐螺线粒体膜电位的剧烈下降,影响光滑双脐螺的氧化磷酸化过程。