鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

作     者：汪铭锐 吴俊花 王飞 邵红霞 钱琨 叶建强 秦爱建 WANG Mingrui;WU Junhua;WANG Fei;SHAO Hongxia;QIAN Kun;YE Jianqiang;QIN Aijian

作者机构：扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室扬州225009 扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室扬州225009 扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2022年第53卷第2期

页      面：597-606页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500803) 

主　　题：鸡传染性贫血病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 抗原表位 

摘      要：拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂。以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达。以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞;采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位。结果显示:成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株,并命名为CIAV-VP2-4A12;亚类鉴定结果表明,该mAb重链为IgG_(1)型,轻链为kappa链;Western blot结果显示,该mAb可以识别大肠杆菌,Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白。使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定,发现该mAb识别抗原表位序列是^(155)KTVRW^(159),序列比对发现该表位在CIAV中高度保守。本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb,并精确鉴定了其识别表位,为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具。