热疗对人喉癌Hep‑2顺铂耐药细胞株生物学行为的影响

作     者：赵运华 陆海涛 陈宝刚 郭有新 马志红 李健 唐艳丽 胡志红 Zhao Yunhua;Lu Haitao;Chen Baogang;Guo Youxin;Ma Zhihong;Li Jian;Tang Yanli;Hu Zhihong

作者机构：河北省承德市中心医院耳鼻喉科承德067000 承德医学院附属医院皮肤科承德067000 

出 版 物：《肿瘤研究与临床》 (Cancer Research and Clinic)

年 卷 期：2022年第34卷第1期

页      面：26-32页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：喉肿瘤 顺铂 抗药性,肿瘤 热疗 

摘      要：目的探讨热疗对人喉癌Hep‑2顺铂耐药(Hep‑2/CDDP)细胞株生物学行为的影响和可能机制。方法采用高浓度冲击联合浓度递增法诱导建立Hep‑2/CDDP细胞株。采用细胞计数法检测Hep‑2亲代细胞株组(未发生顺铂耐药的Hep‑2细胞,采用无顺铂的RPMI 1640培养液培养)、Hep‑2/CDDP细胞组、Hep‑2/CDDP+顺铂细胞组(采用含4 mg/L顺铂的RPMI 1640培养液培养)的细胞增殖能力。Hep‑2/CDDP细胞组和Hep‑2亲代细胞株组分别使用含有0、0.004、0.04、0.4、4、40 mg/L顺铂的培养液培养,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Hep‑2/CDDP细胞对顺铂、长春新碱、5‑氟尿嘧啶的敏感性,计算半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI)。将Hep‑2/CDDP细胞分为4组,对照组细胞于37℃继续培养24 h;热疗组细胞于43℃作用2 h后37℃继续培养22 h;顺铂组用含4 mg/L顺铂的培养液37℃继续培养24 h;热疗联合顺铂组用含4 mg/L顺铂的培养液培养,43℃作用2 h后37℃继续培养22 h。采用MTT法和流式细胞术检测热疗联合顺铂对Hep‑2/CDDP细胞增殖和早期凋亡的影响;采用析因分析法观察热疗联合顺铂对Hep‑2/CDDP细胞增殖和早期凋亡影响的交互作用;采用蛋白质印迹法检测热疗联合顺铂对Hep‑2/CDDP细胞野生型p53和PI3K表达的影响。将Hep‑2/CDDP细胞分为4组,对照组Hep‑2/CDDP细胞于37℃继续培养24 h;化疗药组采用12 mg/L长春新碱或9 mg/L 5‑氟尿嘧啶处理细胞;热疗组Hep‑2/CDDP细胞于43℃作用2 h后37℃继续培养22 h;热疗联合化疗组采用含有12 mg/L长春新碱或9 mg/L 5‑氟尿嘧啶的培养液培养,43℃作用2 h后37℃继续培养22 h。采用MTT法检测热疗分别联合长春新碱、5‑氟尿嘧啶对Hep‑2/CDDP细胞增殖的影响。结果成功建立Hep‑2/CDDP细胞株。不同时间Hep‑2/CDDP细胞组、Hep‑2亲代细胞株组和Hep‑2/CDDP+顺铂细胞组的细胞数差异均无统计学意义(均P0.05),倍增时间分别为43.8、40.6和43.5 h。Hep‑2亲代细胞株组和Hep‑2/CDDP细胞组对顺铂的IC50分别为4.771 mg/L和42.749 mg/L,RI为8.960。热疗联合顺铂可抑制Hep‑2/CDDP细胞增殖(F=327.91,P0.05)。结论热疗可能通过上调野生型p53的表达、抑制PI3K相关通路逆转Hep‑2/CDDP细胞株对顺铂的耐药性。Hep‑2/CDDP细胞株对长春新碱和5‑氟尿嘧啶产生交叉耐药,热疗可增加Hep‑2/CDDP细胞株对长春新碱、5‑氟尿嘧啶的敏感性。