葫芦茶苷保护活性氮诱导内皮细胞线粒体损伤的作用研究

作     者：黄巧凡 吴昊霖 徐怡倩 樊好飞 方星悦 王爱萍 虞道锐 孟庆雯 刘启兵 HUANG Qiao-fan;WU Hao-lin;XU Yi-qian;FAN Hao-fei;FANG Xing-yue;WANG Ai-ping;YU Dao-rui;MENG Qing-wen;LIU Qi-bing

作者机构：海南医学院基础医学与生命科学学院药理学教研室海南海口571199 海南省热带脑科学研究与转化重点实验室海南海口571199 

出 版 物：《海南医学院学报》 (Journal of Hainan Medical University)

年 卷 期：2021年第27卷第24期

页      面：1846-1851页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81960663) 2019年海南医学院大学生创新训练计划项目(X201911810036)。 

主　　题：活性氮 线粒体 葫芦茶苷 内皮细胞 

摘      要：目的:通过葫芦茶苷作用于活性氮致血管内皮细胞损伤模型,探讨其对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法:采用MTT比色法检测葫芦茶苷在5~160μmol/L浓度范围对EA.hy 926内皮细胞存活率的影响;EA.hy 926内皮细胞预给药葫芦茶苷1 h后,给予0.5 mmol/L S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)损伤内皮细胞12 h,通过MTT比色法检测葫芦茶苷对EA.hy 926细胞存活率的影响;Real-time PCR法检测EA.hy 926细胞线粒体特异性因子细胞色素氧化酶1(COX-1)、NADH脱氢酶亚单位1(ND-1)和炎症因子白介素-1β(IL-1β)基因的表达效果,同时采用Western blot法检测Bcl-2关联X蛋白(Bax)和B细胞肿瘤因子2(Bcl-2)经时蛋白表达量的变化;通过线粒体膜电位荧光探针(JC-1)检测葫芦茶苷对EA.hy 926细胞线粒体膜电位的变化规律。结果:MTT法结果表明葫芦茶苷在5~160μmol/L范围内对EA.hy 926细胞无明显细胞毒性且最佳药物保护浓度为40μmol/L。Western Blot法显示GSNO经时损伤EA.hy 926细胞后Bax蛋白表达量呈时间依赖性增高,Bcl-2蛋白表达量与之相反。Real time-PCR结果显示,葫芦茶苷能明显上调COX-1基因(P0.05),且能明显抑制活性氮GSNO诱导的ND-1(P0.05)和IL-1β基因上调(P0.01)。同时JC-1结果显示葫芦茶苷能明显保护线粒体膜电位免受GSNO损伤的作用。结论:活性氮GSNO损伤模型可能通过线粒体DNA损伤诱发Bax等促凋亡蛋白的增加,使抗凋亡因子Bcl-2表达降低。葫芦茶苷对活性氮诱导的内皮细胞线粒体损伤具有一定的保护作用,其机制与抑制ND-1和IL-1β基因表达,上调COX-1基因表达相关。