人IgE Cε2-4蛋白稳定表达细胞株的建立与鉴定

作     者：乔春霞 郭雷鸣 吕明 于鸣 黎燕 冯健男 沈倍奋 QIAO Chun-xia;GUO Lei-ming;L(U) Ming;YU Ming;LI Yan;FENG Jian-nan;SHEN Bei-fen

作者机构：军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室北京100850 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2008年第28卷第7期

页      面：661-665页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：基金项目:国家863基金(2007AA022306) 国家自然科学基金(30490240) 

主　　题：IgE Cε24 FcεR I CHO细胞 信号肽 

摘      要：目的建立稳定高表达人IgE Cε2-4蛋白（E24）的工程细胞株，考察E24蛋白与膜受体（FcεRI）的结合。方法从SKO-007细胞中钓取E24基因，分别克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋）（需要在E24基因前加信号肽序列）和pCMV-L载体；瞬时转染293T细胞，利用双夹心ELISA法鉴定转染上清中的目的蛋白；选择表达量相对高的质粒转染CHO细胞，G418筛选获得稳定细胞株；RT-PCR法在转录水平上检测E24基因，ELISA法鉴定稳定株上清中的E24蛋白，流式细胞术检测E24蛋白与FcεRI的结合。结果成功构建了3种真核表达质粒SP-E24-P3．1、SPⅡ-E24-P3．1和E24-PL，瞬时转染293T细胞，上清中的目的蛋白表达量分别为19．1、19．4和8．7μg／ml。以质粒SPⅡ-E24-P3．1转染CHO细胞，经3轮亚克隆获得了2株稳定高表达E24蛋白的细胞株，表达量均超过25μg／ml。RT-PCR可扩增出细胞株中的E24基因；流式细胞术显示E24蛋白可以与FcεRI呈剂量依赖性的结合。结论经筛选获得了2株表达E24蛋白的工程细胞株，且E24可以特异性的结合FcεRI。