人脐静脉内皮细胞分离及冷冻保存的技术

作     者：蒋红军 贾兵 陈张根 王克强 JIANG Hong-jun,JIA Bing,CHEN Zhang-gen,WANG Ke-qiang ▲ (Department of Cardiovascular Center,Children’s Hospital,Fudan University, ▲Shanghai Institute of Cardiovaseular Diseases-Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China)

作者机构：复旦大学附属儿科医院心血管中心外科 复旦大学附属中山医院-上海市心血管病研究所上海200023 

出 版 物：《复旦学报（医学版）》 (Fudan University Journal of Medical Sciences)

年 卷 期：2004年第31卷第5期

页      面：509-511,514,F004页

核心收录：

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

主　　题：人脐静脉内皮细胞 冻存 复苏后 灌注 冷冻保存 免疫荧光染色 Ⅷ因子 锥虫 生长曲线 消化酶 

摘      要：目的 研究分离、培养、扩增人脐静脉内皮细胞及进行冷冻保存技术 ,探讨建立脐带血管内皮细胞库的可能性。方法 新鲜脐带 4 2条 ,脐静脉内灌注消化酶消化 ,获得内皮细胞 ;以含 2 0 %的胎牛血清M 199液进行培养。采用Ⅷ因子免疫荧光染色及扫描电镜检查 ,鉴定所获内皮细胞及其纯度 ;内皮细胞加入含 10 %DMSO冷冻保存液 ,置于液氮进行保存 ,复苏后进行锥虫蓝试验 ,四氮唑盐 (MTT)试验以及细胞凋亡的流式细胞仪检测。结果 血管内灌注消化液法可获取高纯度的内皮细胞 ,与未冻存细胞相比 ,复苏的细胞活力保持在 95 %以上。复苏后的内皮细胞的生长曲线与未冻存细胞的生长曲线无差异。冻存内皮细胞的凋亡率较未冻存细胞高 ,但无统计学意义。结论 脐静脉灌注酶消化法可获取足够数量及纯度的内皮细胞。冻存的内皮细胞复苏后仍保持较高的活力及体外增殖能力 。