沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响

作     者：武坤 晋臻 李轶勋 李昕 程沈菊 李艳红 郭翀 WU Kun;JIN Zhen;LI Yi-Xun;LI Xin;CHENG Shen-Ju;LI Yan-Hong;GUO Chong

作者机构：昆明医科大学第一附属医院医学检验科云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院云南省检验医学重点实验室云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院医学临床检验诊断省创新团队云南昆明650032 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2021年第29卷第6期

页      面：1768-1774页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：云南省联合专项基金资助项目(2017FE468-035)。 

主　　题：DNA甲基转移酶1 人慢性髓系白血病 高甲基化 Wnt抑制因子-1 

摘      要：目的:探讨沉默DNA甲基转移酶(DNMT1)对人慢性髓系白血病细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子甲基化的影响。方法:构建DNMT1 siRNAi质粒,将DNMT1 siRNAi转染至慢性髓系白血病K562细胞中,采用RT-PCR和Western blot法检测DNMT1基因和相关蛋白的表达,并利用甲基化PCR检测WIF-1基因启动子甲基化水平,台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,Western blot法检测沉默DNMT1基因后Wnt/β-catenin及其下游信号通路蛋白的表达情况。结果:实验组DNMT1 mRNA和相关蛋白表达水平显著低于对照组和阴性对照组(P0.05);成功转染72 h后,对照组和阴性对照组WIF-1基因处于完全甲基化状态,而实验组WIF-1基因启动子区域甲基化水平显著降低。MSP检测结果显示,实验组未甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著增加,而甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著降低。转染成功48 h后,实验组的OD值、活细胞数及集落形成数均显著低于阴性对照组和对照组(P0.05)。实验组的细胞凋亡率显著高于阴性对照组和对照组(P0.05)。实验组K562细胞中β-actin、myc、cyclin D1和TCF-1蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和对照组(P0.05)。结论:沉默DNMT1基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。