建立载脂蛋白E基因敲除小鼠骨髓髓源性生长因子缺失模型及鉴定

作     者：丁燕 向光大 孟碧莹 徐晓丽 陈月富 Ding Yan;Xiang Guangda;Meng Biying;Xu Xiaoli;Chen Yuefu

作者机构：湖南医药学院湖南省怀化市418000 中国人民解放军中部战区总医院湖北省武汉市430700 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2022年第26卷第14期

页      面：2196-2201页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81870573) 项目负责人:向光大 

主　　题：骨髓细胞 MYDGF基因 ApoE基因 MYDGF蛋白 双基因敲除 小鼠 

摘      要：背景:目前关于髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,MYDGF)与动脉粥样硬化及代谢性疾病的研究较少,因此建立一种载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)敲除骨髓MYDGF缺失的小鼠模型对于研究MYDGF与动脉粥样硬化疾病的关系尤为重要。目的:建立ApoE敲除骨髓MYDGF特异性缺失小鼠模型并进行鉴定。方法:ApoE敲除小鼠和骨髓特异性MYDGF敲除小鼠,均购于上海南方模式生物科技股份有限公司。选取5只ApoE敲除小鼠与10只骨髓特异性MYDGF敲除小鼠进行交配,得到基因型为MYDGF^(flox)/+ApoE^(flox)/+F1子代小鼠30只,MYDGF^(flox)/+ApoE^(flox)/+互相进行交配,一共得到基因型为MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox双敲除小鼠30只和ApoE^(flox)/flox小鼠子代小鼠34只。采用PCR法进行MYDGF^(flox)及ApoE^(flox)基因型鉴定,记录MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox双敲除小鼠与ApoE^(flox)/flox小鼠2月龄的体长及体质量,采用Western blotting和免疫荧光检测2组小鼠骨髓组织MYDGF蛋白相对表达量,油红O染色检测2组小鼠胸主动脉斑块面积。实验方案经中国人民解放军中部战区总医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①得到基因型为ApoE^(flox)/flox小鼠共34只、MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox小鼠共30只,2组小鼠体长、体质量比较差异均无显著性意义(均P0.05);②MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox小鼠骨髓组织MYDGF蛋白相对表达量显著低于ApoE^(flox)/flox小鼠(P0.05);③MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox小鼠胸主动脉的斑块面积百分比显著大于ApoE^(flox)/flox小鼠(P0.05);④结果证实成功敲除了ApoE小鼠的MYDGF基因,说明成功构建ApoE敲除骨髓特异性MYDGF缺失小鼠模型,并经基因型及蛋白组织水平鉴定;MYDGF基因缺乏可以加重ApoE基因敲除小鼠的动脉粥样硬化。