玉米MON863质粒DNA标准物质的研制

作     者：马丽侠 周李华 叶德萍 蒋子敬 姜展樾 蒲春如 杜娟兰 韩国全 MA Li-xia;ZHOU Li-hua;YE De-ping;JIANG Zi-jing;JIANG Zhan-yue;PU Chun-ru;DU Juan-lan;HAN Guo-quan

作者机构：中国测试技术研究院生物研究所四川成都610021 四川农业大学食品学院四川雅安625000 

出 版 物：《化学试剂》 (Chemical Reagents)

年 卷 期：2021年第43卷第12期

页      面：1729-1734页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFC1603400) 

主　　题：质粒DNA 标准物质 数字PCR 双重数字PCR 转基因玉米 

摘      要：转基因成分检测是转基因生物安全应用和管理的重要技术支撑,转基因标准物质种类的不足可影响转基因生物检测方法的建立和标准化。选取玉米MON863中外源基因MON863与内标基因Adh1构建质粒标准物质,通过测序验证,以双重数字PCR技术对获得的质粒DNA进行均匀性及不同温度下(-20、4、25、37℃)短期(14 d)和-20℃长期(6个月)稳定性检验,联合8家实验室进行定值分析。结果显示,玉米MON863质粒DNA标准物质具备良好的均匀性,可以在-20℃稳定存放6个月;外源与内标基因的拷贝数比值为1.01,扩展不确定度为0.04;拷贝数为5.78×10^(10) copies/μL,扩展不确定度为0.29×10^(10) copies/μL。获得的标准物质适用于玉米MON863的方法学建立、定性定量检测和实验室质控等应用。