酿酒酵母钙通道膜蛋白单克隆抗体制备及鉴定

作     者：董晓宇 DONG Xiaoyu

作者机构：大连大学生命科学与技术学院辽宁大连116622 

出 版 物：《化工进展》 (Chemical Industry and Engineering Progress)

年 卷 期：2021年第40卷第S1期

页      面：334-343页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(21476032)。 

主　　题：酿酒酵母 钙通道膜蛋白 分子生物学 单克隆抗体 生化工程 

摘      要：以酿酒酵母电压门控钙通道膜蛋白(Cch1p)、牵张敏感性钙通道膜蛋白(Mid1p)和瞬时受体电位钙通道膜蛋白(Yvc1p)为研究材料,制备其单克隆抗体。采用生物信息学方法确定3种膜蛋白抗原表位,根据分析结果克隆抗原基因,并进行原核表达和表达产物分析鉴定,通过Ni2+-NTA树脂亲和层析技术获得重组抗原蛋白,免疫小鼠后细胞融合技术制备单克隆抗体,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体效价,免疫印迹技术检测单克隆抗体对重组纯化抗原和天然酿酒酵母钙通道膜蛋白的反应性和特异性。生物信息学分析结果表明,Cch1p、Mid1p和Yvc1p抗原表位可能分别位于1~300位氨基酸残基、359~548位氨基酸残基、1~236位氨基酸残基;克隆目的基因条带大小分别为926bp、570bp和708bp,与预期结果一致;原核表达抗原蛋白分子量分别为60000、25000和30000,Western blot检测条带正确;重组纯化抗原免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术制备单克隆抗体,ELISA检测显示单克隆抗体效价分别高达1∶256000、1∶128000和1∶64000,Western blot检测到3种重组纯化抗原和天然酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p。这些结果说明本文制备的单克隆抗体可以成功用于检测酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p表达的相关研究。