人脐带沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞的共培养

作     者：田毅 关方霞 胡祥 杨波 杜英 周长辉 巴云涛 谷晨熙 雷宁静 王晓薇 Tian Yi;Guan Fang-xia;Hu Xiang;Yang Bo;Du Ying;Zhou Chang-hui;Ba Yun-tao;Gu Chen-xi;Lei Ning-jing;Wang Xiao-wei

作者机构：郑州大学第一附属医院神经外科河南省郑州市450052 河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室河南省郑州市450052 郑州大学生物工程系河南省郑州市450001 江苏省干细胞与生物治疗公共技术服务平台江苏省泰州市225300 深圳市北科细胞工程研究所广东省深圳市518000 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室河南省郑州市450052 郑州大学临床医学系河南省郑州市450001 湖南师范大学生命科学学院湖南省长沙市410081 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2010年第14卷第10期

页      面：1721-1728页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：郑州大学211三期建设项目“干细胞基础与临床研究” 江苏省干细胞与生物治疗公共技术服务平台发展(BM2008146)项目 

主　　题：共培养 脑肿瘤干细胞 CD133 沃顿胶间充质干细胞 人脐带 

摘      要：背景:人脐带沃顿胶间充质干细胞满足了国际细胞治疗协会规定的间充质干细胞的特点,能够向骨、软骨、脂肪、肌肉、神经细胞诱导分化并支持其他干细胞的扩增,对免疫系统有良好的耐受性,对肿瘤有定向迁徙性。目的:观察人脐带沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞体外共培养后,脑肿瘤干细胞的生物学变化。方法:以原位法培养人脐带沃顿胶间充质干细胞,以酶消化法培养人脑肿瘤组织脑肿瘤干细胞,以细胞传代法获取第3代细胞。应用不添加任何生长因子的无血清培养基将两种细胞在24孔板中进行直接共培养。第3,7天应用流式细胞术检测细胞CD133表达;应用免疫荧光法检测贴壁细胞巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达;将第3天离心所得的共培养上清液重悬第3代脑肿瘤干细胞并与正常培养悬浮的第3代脑肿瘤干细胞置入96孔板中,应用酶标仪检测两组细胞生长曲线的差异。结果与结论:两种细胞共培养后在倒置显微镜下可见脑肿瘤干细胞球随着培养时间的增加出现分解、贴壁、分化现象;贴壁的脑肿瘤干细胞免疫荧光染色胶质纤维酸性蛋白和巢蛋白均阳性。恶性程度高的脑肿瘤组织培养的脑肿瘤干细胞表达CD133量越高,而与沃顿胶间充质干细胞共培养后随着时间的变化均出现CD133表达量降低。共培养3d的上清液培养的脑肿瘤干细胞与正常培养基培养的脑肿瘤干细胞相比,增殖明显受到抑制。结果显示沃顿胶间充质干细胞与脑肿瘤干细胞体外共培养后可限制脑肿瘤干细胞表面标记物CD133的阳性率以及细胞增殖能力并促使其分化。