熊蜂生假丝酵母启动子的筛选及强度分析

作     者：石依博 张利华 张敏 夏媛媛 杨海泉 沈微 陈献忠 SHI Yibo;ZHANG Lihua;ZHANG Min;XIA Yuanyuan;YANG Haiquan;SHEN Wei;CHEN Xianzhong

作者机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2021年第48卷第10期

页      面：3569-3579页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 071005[理学-微生物学] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：江苏省自然科学基金(BK20171138) 

主　　题：熊蜂生假丝酵母 启动子 密码子优化 绿色荧光蛋白 基因表达与调控 

摘      要：【背景】熊蜂生假丝酵母(Starmerella bombicola)作为一种非常规假丝酵母菌株,因其具备高产槐糖脂生物表面活性剂的能力而受到广泛关注。然而,由于自身的表达系统并不完善,限制了该菌株的代谢工程改造。【目的】克隆、筛选及鉴定新的系列内源启动子表达元件。【方法】通过对比分析熊蜂生假丝酵母全基因组及9种功能已知目的基因信息,并结合启动子预测网站,筛选获得系列启动子候选序列,以SbGFP (密码子优化后的酵母增强型绿色荧光蛋白)为报告基因进行整合表达,通过绿色荧光蛋白强度及转录水平分析鉴定启动子强度。【结果】在分别以葡萄糖和油酸作为唯一碳源的条件下,启动子PTEF1和PGPD在不同碳源培养条件下均显示出较高的转录水平。启动子PCYP52M1、PUGTA1、PUGTB1及PMOB在以油酸为唯一碳源时具有弱转录活性,而在以葡萄糖为唯一碳源时则未检测到它们具有转录活性,推测它们是油酸诱导型启动子。进一步利用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)对SbGFP进行转录水平分析,检测结果与绿色荧光表达水平一致。【结论】获得了系列熊蜂生假丝酵母内源性启动子,进一步丰富了该菌株的表达元件,为菌株的代谢工程改造及基因的表达与调控奠定了理论基础。