蟾皮中吲哚烷胺类生物碱对LPS活化的中性粒细胞抗炎活性及机制研究

作     者：张瑜 丁耀华 魏晓露 周严严 司南 杨健 王宏洁 赵海誉 边宝林 ZHANG Yu;DING Yao-hua;WEI Xiao-lu;ZHOU Yan-yan;SI Nan;YANG Jian;WANG Hong-jie;ZHAO Hai-yu;BIAN Bao-lin

作者机构：中国中医科学院中药研究所北京100700 西昌富华金蟾生物科技有限公司四川西昌615099 

出 版 物：《中国中药杂志》 (China Journal of Chinese Materia Medica)

年 卷 期：2021年第46卷第18期

页      面：4774-4781页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家中药标准化项目(ZYBZH-C-AH-01) 中国中医科学院重点研究专项(ZZ10-007) 国家“重大新药创制”科技重大专项(2019ZX09201005-006-002)。 

主　　题：蟾皮 吲哚烷胺类生物碱 中性粒细胞 炎症因子 凋亡 

摘      要：吲哚烷胺类生物碱(indolealkylamines,IAAs)是蟾皮中主要的亲水性物质基础,主要包括游离型的N-甲基五羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、脱氢蟾蜍色胺和结合性的蟾蜍噻咛。该研究选择脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的中性粒细胞为体外炎症模型,对蟾皮中5个IAAs单体抗炎活性构效关系及抗炎机制进行探讨。实验分组为空白组、模型组(1μg·mL^(-1) LPS)、阳性药组(100μg·mL^(-1)吲哚美辛)以及5个IAAs低、中、高剂量(50、100、200μg·mL^(-1))组。首先使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测LPS刺激后各组中性粒细胞上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β的分泌情况,然后利用Annexin V/PI双染法观察各组中性粒细胞凋亡情况,并用Western blot法检测各组细胞中caspase-3、Bax、Bcl-2、beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果表明,与模型组相比,IAAs干预后可降低LPS引起的炎症因子分泌过多,且游离型IAAs(N-甲基五羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、脱氢蟾蜍色胺)活性强于结合型IAAs蟾蜍噻咛,其中蟾蜍色胺的效果最为显著。Annexin V/PI结果表明,与空白组相比,模型组可延迟中性粒细胞早期凋亡,蟾蜍色胺处理后可呈剂量依赖关系促进中性粒细胞凋亡,其机制可能与提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达有关。此外,LPS刺激后,可以激活中性粒细胞的自噬信号通路。该研究首次证明,IAAs可降低由LPS引起的中性粒细胞炎症因子的分泌。以蟾蜍色胺为例,其发挥药效的机制可能与促进中性粒细胞凋亡有关。