hsa-miRNA-424-5p靶向GPR30对宫颈癌恶性生物学行为的影响

作     者：王佳佳 丁佳 常永霞 王新生 张斌 刘训涛 徐丹丹 张凡 WANG Jiajia;DING Jia;CHANG Yongxia;WANG Xinsheng;ZHANG Bin;LIU Xuntao;XU Dandan;ZHANG Fan

作者机构：河北北方学院生命科学研究中心河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院病理科 

出 版 物：《山东医药》 (Shandong Medical Journal)

年 卷 期：2021年第61卷第28期

页      面：42-46页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

基　　金：河北省财政厅专科能力建设和专科带头人培养项目(361009) 

主　　题：宫颈癌 微小RNA-424-5p 细胞克隆 细胞侵袭 细胞凋亡 

摘      要：目的探讨hsa-miRNA-424-5p(miR-424-5p)对宫颈癌恶性生物学行为的影响及机制。方法选取12例正常宫颈组织和33例宫颈癌组织;将宫颈癌HeLa细胞随机分为NCmimics组、mimics组、NCinhibitor组、inhibitor组,分别转染miR-424-5p模拟物阴性对照、模拟物、抑制物阴性对照、抑制物序列。采用实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织中miR-424-5p及新型雌激素受体G蛋白偶联受体30(GPR30)mRNA表达及宫颈癌细胞转染效率;平板克隆形成实验检测克隆形成能力;Transwell小室测定细胞侵袭能力;AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测算细胞凋亡率;双荧光素酶实验初步验证miR-424-5p与GPR30的靶向关系;Westernblotting法进一步证实miR-424-5p和GPR30的靶向关系并检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白。结果实时荧光定量PCR实验结果显示,宫颈癌组织较正常宫颈组织中miR-424-5p相对表达量减少,而GPR30 mRNA表达增加(P均0.05)。转染24 h后,NCmimics组、mimics组、NCinhibitor组、inhibitor组miR-424-5p相对表达量分别为1.00±0.06、10.91±0.42、1.00±0.03、0.01±0.00,细胞克隆率分别为(36.87±0.35)%、(17.43±1.40)%、(14.67±0.65)%、(21.23±0.68)%,细胞侵袭数分别为(179±9)、(71±5)、(133±5)、(221±11)个,细胞凋亡率分别为(12.73±0.31)%、(18.00±1.65)%、(22.37±2.17)%、(15.77±1.88)%,GPR30蛋白表达分别为1.00±0.03、0.72±0.03、1.00±0.11、2.55±0.13,p-AKT/AKT分别为1.00±0.07、0.84±0.02、1.00±0.05、1.17±0.08,p-mTOR/mTOR分别为1.00±0.08、0.65±0.14、1.00±0.05、1.43±0.25,mimics组与NCmimics组相比,inhibitor组与NCinhibitor组相比,P均0.01。双荧光素酶证实GPR30为miR-424-5p的直接靶基因。结论miR-424-5p在宫颈癌中发挥抑癌基因的作用,过表达miR-424-5p能够抑制宫颈癌细胞的克隆、侵袭,并促进细胞凋亡;miR-424-5p可能通过GPR30作用于PI3K/AKT/mTOR通路从而抑制宫颈癌的恶性生物学行为。