人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库的构建与鉴定

作     者：张红英 郭嘉雯 员月明 徐志勇 邓长生 王琪 ZHANG Hong-ying;GUO Jia-wen;YUAN Yue-ming;XU Zhi-yong;DENG Chang-sheng;WANG Qi

作者机构：广州中医药大学科技产业园广州510405 广州中医药大学青蒿研究中心广州510405 

出 版 物：《西南医科大学学报》 (Journal of Southwest Medical University)

年 卷 期：2021年第44卷第4期

页      面：333-337页

学科分类：12[管理学] 1201[管理学-管理科学与工程(可授管理学、工学学位)] 

基　　金：广东省科技计划项目(2020A0505090009) 广东省教育厅项目(2020KZDZX1055) 国家自然科学基金项目(81873218、82074301) 

主　　题：肺癌 λ噬菌体 cDNA文库 SMART 

摘      要：目的构建人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为抗肺癌药物的筛选和药物作用分子机理的研究奠定基础。方法提取人肺癌细胞A549λ总RNA,用DnaseⅠ处理后,采用RNA 5’末端移动反转录(switching mechanism at 5′end of RNA transcript,SMART)技术合成双链cDNA,切胶回收去除短片段,依次用蛋白酶K和SfiⅠ进行酶切,并与经过酶切的λTriplEx2载体连接后进行体外包装,得到初级文库。初级文库扩增后,测定扩增文库滴度,并通过PCR鉴定插入片段。结果构建的人肺癌细胞A549λ噬菌体初级文库库容为1.88×10^(7)pfu/mL,扩增文库滴度为2.50×10^(9)pfu/mL,插入cDNA片段为500~3000 bp。结论成功构建了人肺癌细胞A549λ噬菌体cDNA文库,为进一步筛选治疗肺癌的药物作用分子机理奠定了基础。