农杆菌介导5种中草药叶片瞬时表达的研究

作     者：孙敏 达晓伟 张悦婧 李颖 庞海龙 冯汉青 SUN Min;DA Xiaowei;ZHANG Yuejing;LI Ying;PANG Hailong;FENG Hanqing

作者机构：西北师范大学生命科学学院兰州730070 西北师范大学新农村发展研究院兰州730070 

出 版 物：《西北植物学报》 (Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica)

年 卷 期：2021年第41卷第7期

页      面：1240-1247页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：甘肃省引导科技创新发展专项资金(2019ZX-05) 西北师范大学新农村发展研究院开放基金 国家自然科学基金(31870246) 甘肃省重点研发计划(18YF1NA051) 

主　　题：农杆菌 瞬时表达 二元载体(非病毒型和病毒型) 中草药 GFP 

摘      要：农杆菌介导的瞬时基因表达因其操作简单、可重复性高和实验成本低而成为研究基因功能、生产活性蛋白的有效方法。该研究以非病毒型(载体Ⅰ)和病毒型二元载体(载体Ⅱ)及两种农杆菌(EHA105、LBA4404)为介导,通过叶片渗透法在5种中草药(甘草、黄芩、黄芪、大黄、板蓝根)叶片中进行报告基因GFP的瞬时表达,并对影响表达的因素进行分析,以明确中药材中适宜瞬时表达技术应用的物种材料。结果显示:(1)农杆菌在5种中草药叶片中的瞬时转化效率受到载体、菌株和植物物种类型的影响。(2)在所选的5种中草药植物中,与无转化载体的菌株相比,当农杆菌重悬液OD600为0.8、叶片侵染5~7 d时,含非病毒型二元载体的EHA105菌株在甘草叶片中荧光强度最高,大黄次之;含病毒型二元载体的LBA4404菌株在黄芩叶片中GFP荧光表达量最高;含不同载体的不同菌液侵染的甘草、黄芪叶片仅有注射孔处检测出荧光或几乎无荧光蛋白表达,即未向四周扩散表达;在板蓝根叶片中检测出弱荧光或无荧光强度。研究表明,甘草和黄芩植物叶片可作为农杆菌介导基因瞬时表达的材料。