金属蛋白酶组织抑制剂1基因转染对系膜细胞表达纤连蛋白和Ⅳ型胶原的影响

作     者：林洪丽 于志恒 傅博 吕杨 陈香美 

作者机构：解放军总医院肾内科解放军肾脏病中心暨重点实验室 100853 北京 

出 版 物：《中华肾脏病杂志》 (Chinese Journal of Nephrology)

年 卷 期：2002年第18卷第3期

页      面：166-170页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(3000080) 国家重点基础研究发展规划基金(G2000057003) 

主　　题：金属蛋白酶组织抑制剂1 基因转染 纤连蛋白 Ⅳ型胶原 肾小球系膜细胞 肾疾病 

摘      要：目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1对大鼠肾小球系膜细胞表达纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原的影响。方法 应用亚克隆技术构建正义pLXIN-TIMP-1(PLT)和反义pLXIN-ATIMP-1(PLA)两个逆转录病毒载体,经PA317细胞包装后,得到高滴度的病毒上清,分别感染大鼠系膜细胞,用PCR及Northern杂交鉴定外源基因的整合和表达。Northern杂交及ELISA方法检测大鼠系膜细胞内源性TIMP-1、FN和Ⅳ型胶原的表达。结果 外源TIMP-1基因稳定整合到大鼠肾小球系膜细胞中,并获得高效表达。感染正义TIMP-1基因后,大鼠系膜细胞内源性TIMP-1表达没有变化,细胞外基质成分FN和Ⅳ型胶原的蛋白质水平的表达明显增高;与之相反,感染反义的TIMF-1基因后,大鼠内源性TIMP-1下调,细胞外基质成分FN和Ⅳ型胶原的蛋白质水平的表达明显降低。然而,上述系膜细胞FN和Ⅳ型胶原的mRNA水平均没有变化。结论TIMP-1过表达引起FN和Ⅳ型胶原增多,反义TIMP-1则使FN和Ⅳ型胶原的表达下调。提示反义TIMP-1可通过促进肾脏细胞外基质降解而减轻其积聚,为进一步在某些纤维化肾脏疾病中应用反义TIMP-1进行基因治疗奠定一定的实验基础。