纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析

作     者：李藤菲 王诗雨 蒋欣如 孙淼 李婷婷 林家锋 王颖 李永刚 陶晓莉 LI Tengfei;WANG Shiyu;JIANG Xinru;SUN Miao;LI Tingting;LIN Jiafeng;WANG Ying;LI Yonggang;TAO Xiaoli

作者机构：锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2021年第47卷第4期

页      面：934-942页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：辽宁省教育厅大学生创新训练项目(201910160037) 

主　　题：纳尔逊湾正呼肠孤病毒 蛋白互作 非结构蛋白 免疫荧光法 酵母双杂交实验 

摘      要：目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制。方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和分布;用NBV感染BHK细胞,采用Western blotting法检测μNS和σNS蛋白在感染细胞中的表达。构建σNS蛋白N末端10~60个氨基酸(aa)残基缺失的质粒,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞内共定位的结合区域,酵母双杂交实验验证μNS和σNS蛋白相互作用的结合区域。结果:亚细胞定位显示,NBV的μNS蛋白在无其他病毒蛋白的情况下会形成包涵体结构,而σNS蛋白弥散地分布在整个细胞质中。Western blotting检测证实μNS和σNS蛋白在感染细胞中表达。采用偶联抗体进行免疫染色,共聚焦显微镜下观察到μNS和σNS蛋白共定位于细胞质中。利用酵母双杂交实验检测到与μNS蛋白相互作用的σNS蛋白的基本区域位于σNS蛋白N末端区域的60个aa残基区域内。结论:NBV自噬相关蛋白σNS蛋白可以通过与μNS蛋白相互作用而共同表达于病毒包涵体中,σNS蛋白与μNS蛋白的结合区域位于σNS蛋白N末端的60个aa残基区域内。