鸡Caspase-1基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：郭慧芳 李宁 王白玉 乔麒龙 黄庆 李永涛 王增 赵军 GUO Hui-fang;LI Ning;WANG Bai-yu;QIAO Qi-long;HUANG Qing;LI Yong-tao;WANG Zeng;ZHAO Jun

作者机构：河南农业大学动物医学院河南郑州450046 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第43卷第5期

页      面：521-526页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31772771) 

主　　题：鸡Caspase-1基因 SYBR GreenⅠ染料 荧光定量PCR 标准曲线 检测 

摘      要：为了建立快速定量检测鸡Caspase-1基因的方法,本研究根据鸡Caspase-1基因序列设计特异性检测引物,PCR扩增Caspase-1基因片段,构建pMD-Caspase-1重组质粒。以该重组质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立标准曲线,并通过反应条件优化、特异性、敏感性及重复性等试验,建立了鸡Caspase-1基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究建立的该荧光定量PCR方法在重组质粒标准品为1.0×10^(3)拷贝/μL~1.0×10^(8)拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;该荧光定量PCR方法对Caspase-1基因的扩增具有较强的特异性;对重组质粒标准品的检测下限为1.0×10^(2)拷贝/μL,比常规PCR敏感100倍;批内和批间变异系数分别在0.51%~4.41%和0.37%~0.88%,重复性好。利用所建立的方法可以定量检测致病性禽腺病毒血清4型感染鸡不同组织中Caspase-1的转录水平。本研究方法的建立将为研究鸡Caspase-1在免疫反应和疫病发展过程中的作用提供技术支持。