腐蹄病致病因子节瘤拟杆菌蛋白酶在大肠杆菌中的高效表达及其启动子分析
OVEREXPRESSION OF AN EXTRACELLULAR BACTEROIDES NODOSUS PROTEASE IN *** AND ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF ITS PROMOTER作者机构:农业部动物检疫所 澳大利亚维多利亚州兽医研究所
出 版 物:《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)
年 卷 期:1991年第31卷第6期
页 面:433-437页
核心收录:
学科分类:090601[农学-基础兽医学] 1002[医学-临床医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学]
摘 要:节瘤拟杆菌是羊腐蹄病的主要致病因子,它能产生细胞外蛋白酶。本文所报道的是其中的一种蛋白酶(40 kDa)基因的亚克隆、在大肠杆菌中的高效表达以及 N-末端多肽序列。用Sphl+Scal 酶切原克隆(插入片段约为15kb),鸟枪法克隆于 pTZ18R 载体,用免疫学方法筛选其亚克隆文库,并用 SDS/聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其表达。然后纯化其亚克隆 DNA 片段,用Sau3AI 消化,克隆于 pKK_(?)启动子选择载体,进行启动子的分离和分析。用分光光度计方法定量测定 CAT(氯霉素乙酰转移酶)活性,从而确定其启动子的强弱。